2000 Fiscal Year Annual Research Report

脳、免疫系における極微少細胞集団中の遺伝子発現頻度解析によるタンパク質機能解明

Research Project

Project/Area Number	12202010
Research Institution	University of Tsukuba
Principal Investigator	内田和彦筑波大学, 基礎医学系, 助教授 (90211078)
Keywords	脳 / 遺伝子発現頻度解 / 極微少細胞集団 / ノックアウトマウス
Research Abstract	[目的]脳は機能的、位置的に異なる細胞集団、組織からなる。また免疫系は分化段階において異なる性質をもった細胞群に分けることができる。これらの細胞集団における機能分担を明らかにすることを目的として、極微少細胞集団中の遺伝子発現頻度解析を行い、遺伝子からタンパク質機能の解明に結びつける。 [方法]マイクロアレイもしくはマクロアレイによってマウスの脳の各部位を採取し、脳の特定領域での遺伝子発現を解析し、再アレイ化する。マイクロダイセクションによって極微少細胞集団の取り出し、高感度遺伝子発現頻度解析を行う。厳密な定量性が要求されるため、まずプローブの固定化を均一にするとともに、内部コントロールを用いた定量化を試みる。 [結果] 1.極微量組織を用いた脳特異的遺伝子発現解析クローンの選択マウス脳由来cDNA5000個を用いたマイクロアレイを作製した。解剖学的に特徴のある脳部位、機能的に分類されている領域に着目して細胞を切り出し、遺伝子発現頻度解析を行った。3ヶ月齢のP53のノックアウトマウスを用いた。p53-/- ♂マウスbrain(大脳皮質部)とp53+/+ ♂マウスbrain(大脳皮質部)を切り出し比較した結果、複数のp53の下流で調節を受けている遺伝子を見いだした。その中にGタンパク質にカップルしたオーファン受容体が見つかった。その機能について検討している。 2.高感度遺伝子発現頻度解析システムの構築 p53遺伝子の一部の配列を複数選択し、これに相当するオリゴヌクレオチドを合成し、固定化した電極を用いて、電気化学的にハイブリド形成を検出し、測定電流応答の差が発現量ともっとも相関する条件を得た。また通常のDNAマイクロアレイ法を用いてmRNA量の微量測定を行うため、DNAを用いたモデル実験を行い、細胞あたり2コピーから10コピーまでの定量性が得られるシステムを開発した。

Research Products

(8 results)

All Other

All Publications (8 results)

[Publications] Tanaka,M., et al.: "HTLV-1 infection to mice : proliferation of cell clones with integrated HTLV-1 provirus in lymphoid organs"J.Virol.. (In press). (2001)
[Publications] Uchida,M., et al.: "Genetic and functional analysis of PARP, a DNA strand break-binding enzyme"Mut.Res.. (In press). (2001)
[Publications] Feng,R., et al.: "Cell-free entry of human T-cell leukemia virus type 1 to mouse cells"Jpn.J.Cancer Res.. (In press). (2001)
[Publications] Ghosh,M., et al.: "Cyclooxygenase expression in the gallbladder"Int.J.Mol.Med.. 6. 527-532 (2000)
[Publications] Kanai.M., et al.: "Poly(ADP-ribose) polymerase localizes to the centrosomes and chromosomes"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 278. 385-389 (2000)
[Publications] Kashiwagi H.and Uchida K.: "Genome-wide profiling of gene amplification and deletion in cancer"Human Cell. 13. 135-141 (2000)
[Publications] 内田和彦: "ゲノム創薬の新潮流"シーエムシー. 181 (2000)
[Publications] 内田和彦: "創薬サイエンス入門ゲノム世紀へのパラダイムシフト"共立出版. 250 (2000)

2000 Fiscal Year Annual Research Report

脳、免疫系における極微少細胞集団中の遺伝子発現頻度解析によるタンパク質機能解明

Principal Investigator

内田 和彦 筑波大学, 基礎医学系, 助教授 (90211078)

Research Products

[Publications] Tanaka,M., et al.: "HTLV-1 infection to mice : proliferation of cell clones with integrated HTLV-1 provirus in lymphoid organs"J.Virol.. (In press). (2001)

[Publications] Uchida,M., et al.: "Genetic and functional analysis of PARP, a DNA strand break-binding enzyme"Mut.Res.. (In press). (2001)

[Publications] Feng,R., et al.: "Cell-free entry of human T-cell leukemia virus type 1 to mouse cells"Jpn.J.Cancer Res.. (In press). (2001)

[Publications] Ghosh,M., et al.: "Cyclooxygenase expression in the gallbladder"Int.J.Mol.Med.. 6. 527-532 (2000)

[Publications] Kanai.M., et al.: "Poly(ADP-ribose) polymerase localizes to the centrosomes and chromosomes"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 278. 385-389 (2000)

[Publications] Kashiwagi H.and Uchida K.: "Genome-wide profiling of gene amplification and deletion in cancer"Human Cell. 13. 135-141 (2000)

[Publications] 内田和彦: "ゲノム創薬の新潮流"シーエムシー. 181 (2000)

[Publications] 内田和彦: "創薬サイエンス入門ゲノム世紀へのパラダイムシフト"共立出版. 250 (2000)

内田和彦筑波大学, 基礎医学系, 助教授 (90211078)