2001 Fiscal Year Annual Research Report
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12204011
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Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
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| Research Institution | Kitasato University |
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Principal Investigator |
前田 忠計 北里大学, 理学部, 教授 (90265728)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
藤田 芳邦 北里大学, 医学部, 助教授 (50133286)
亀谷 徹 北里大学, 医学部, 教授 (50101035)
大石 正道 北里大学, 理学部, 助手 (40233027)
松崎 尹雄 三菱科学生命科学研究所, 構造解析研究室, 室長
古舘 専一 北里大学, 医学部, 助教授 (80095512)
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| Keywords | プロテオーム解析 / 糖尿病特異的プロテオーム / ob / obマウス / db / dbマウス / OLETFラット / ヒト標品のプロテオーム解析 / ヒト・ティッシュ・バンク / 電気泳動画像データベース |
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| Research Abstract |
(1)これまでの2次元電気泳動法は各タンパク質の電気泳動的易動度と存在量の情報を与えるが、糖尿病解析にはこれだけでは不十分である。タンパク質の病的翻訳後修飾の情報(の一部)を得るため、酸化ストレスにより誘導されたタンパク質側鎖のアルデヒド基の検出法を開発した。これを使い、糖尿病モデルOLETFラット左心室の複数のタンパク質が酸化傷害を受けていることを発見した。
(2)OLETFラットに高カロリー特別食を与えたものと普通食を与えたものについて各種臓器のプロテオームを解析し、腎皮質での異常を発見した。腎皮質全体では特にhsp70が特別食を与えたラットで増加していた。また腎皮質を細胞分画し、特にミトコンドリア画分で多数のスポットに異常を検出した。2000年7月末に導入したLC-イオントラップ型質量分析計は、研究室メンバーの訓練と運転条件の最適化に約半年を要したが、現在、ほぼ2個/時間の速度と80%のヒット率でタンパク質を同定できる。
(3)糖尿病患者血清アルブミンの酸化傷害が健常人と比べて進行していることを検出した。
(4)医学部内で、ヒト組織と体液のティッシュ・バンクをセンター化し、平成14年度から予算を計上・実現する計画が認められた。ティッシュ・バンク運用開始と同時に、病院内の遺伝子カウンセリング体制を発足させる。
(5)糖尿病病因タンパク質の機能を阻害するペプチドをランダム・ペプチド・ライブラリーの中から発見する。この戦略を実現するために、新規配列特異的なDNA結合タンパク質を用いる方法を考案した。このタンパク質のDNA結合ドメイン(102残基)が3本のαヘリックスとβシートから構成されていることを明らかにした。
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[Publications] Oh-Ishi M, Satoh M, Maeda T: "Preparative two-dimensional gel electrophoresis with agarose gels in the first dimension for high molecular mass proteins"Electrophoresis. 21. 1653-1669 (2000)
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[Publications] Hishinuma A, Furudate S, Oh-Ishi M, Nagakubo N, Namatame T, Ieiri T: "A novel missense mutation(G2320R) in thyroglobulin causes hypothyroidism in rdw rats"Endocrinology. 141. 4050-4055 (2000)
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[Publications] Oh-Ishi M, Maeda T: "Separation techniques for high-molecular-mass proteins"Journal of Chromatography, Biomedical Applications.. (in press). (2002)
