核膜を識別する核内共生細菌ホロスポラの全ゲノム塩基配列の解読と機能開発

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12206066
• Research Institution: Yamaguchi University
• Principal Investigator: 藤島 政博 山口大学, 理学部, 教授 (40127783)
• Keywords: 核内共生細菌 / ホロスポラ / プロテオーム解析 / ゾウリムシ / 細胞内共生 / 遺伝子発現 / ターゲッティング / ストレス応答

Research Abstract

1.ホロスポラ・オブツサのゲノムは現在までに約60%(ゲノムサイズ約1.7Mbp)が解読された。2D-SDS-PAGEゲルの18種のスポットの部分アミノ酸配列を決定し、解読済みゲノム部分にORFがあるかどうかと既知タンパク質とのidentityの有無を調べた。その結果、ORFが見つかったのは3種のみ、高いホモロジーが確認されたのは8種であった。解読済みゲノム部分(60%)にORFが3/18(17%)しか検出されないことは、宿主から輸入したタンパク質が多いことを示唆している。
2.ディファレンシャルディスプレー法で、ホロスポラによって発現が抑制される宿主遺伝子を12種、発現が増加する遺伝子を3種検出し、前者のうちの4種の遺伝子断片のシーケンスを行った。その1種は、真核細胞核で最初のコドン逸脱性の発見になったにもかかわらず機能が不明のままになっていたイモビリゼーションアンチジェンA遺伝子であった。ノーザンブロットでも、この遺伝子発現がホロスポラの感染によって抑制されることが確認された。
3.ホロスポラが細胞外膜に露出させている標的核膜識別センサー(リポ多糖)を精製した。
4.ホロスポラの標的核膜貫通部位に特異的なモノクローナル抗体を1種類作成し、抗原の性質を調べた。

Research Products

• [Publications] Miki Kawai: "Invasion of the macronucleus of Paramecium caudatum by the bacterium Holospora obtusa Fates of the bacteria and timings of invasion steps."European Journal of Protistology. 36. 46-52 (2000)
• [Publications] Maki Murata-Hori: "Effects of G1 arrest substances on cells in the G1, S and G2 phases of the celcycle in Tetrahymena"European Journal of Protistology. 36. 313-318 (2000)
• [Publications] Eriko Oosaki: "Purification of germinal-vesicle-breakdown-inducing proteins from Tetrahymena pyriformis"European Journal of Protistology. 36. 459-464 (2000)
• [Publications] Ilya N,Skovorodkin: "Fates of the endonuclear symbiotic Holospora obtusa and Holospora undulata Injected into the macronucleus of Paramecium caudatum"European Journal of Protistology. (印刷中). (2001)
• [Publications] Manabu Sugii: "Purification of GVBD-inducing proteins from Tetrahymena thermophila"Journal of Eukaryotic Microbiology. (印刷中). (2001)