2000 Fiscal Year Annual Research Report
運動ニューロン生存活性を持つRNAの構造と機能の解析
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12210137
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| Research Institution | Nippon Medical School |
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Principal Investigator |
宮田 雄平 日本医科大学, 医学部, 教授 (00014275)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
浜田 剛 日本医科大学, 医学部, 助手 (30291727)
永野 昌俊 日本医科大学, 医学部, 助手 (60271350)
程 久美子 日本医科大学, 医学部, 助教授 (50213327)
高橋 史峰 日本医科大学, 医学部, 助手 (80328814)
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| Keywords | 運動ニューロン / RNA / 生存因子 / 脊髄 / 自然神経細胞死 / ALS / 発生分化 |
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| Research Abstract |
以前の研究により運動ニューロン生存活性を持つ新規物質を単離精製し、RNAであると結論した。当該RNAの構造を決定し、その生理活性を明らかにすることを目的とした。
1)RNAによる生存活性の確認。
前回までの分離精製法と異なり、ニワトリ胚骨格筋より直接RNAを抽出した。ニワトリ6日目胚の脊髄神経細胞を一次培養しバイオアッセイ系とし、抽出したRNAを加え、脊髄神経細胞に生存活性を有すことを確認した。
2)cDNA libraryの作成とスクリーニング
上記total RNAをDEAE sepharoseで分画したところ、5M NaCl溶出画分のRNAに強い活性が検出された。この画分よりcDNA libraryを作成し、各クローンの塩基配列を決定した。in vitro transcriptionにより作成したRNAの生存活性をバイオアッセイ系に適用し各クローンのスクリーニングを行った。一つのクローン由来のRNAが濃度依存的に活性を示した。このRNAをmns(motoneuron survival)-RNAと名付けた。
3)脊髄発生分化に関与する遺伝子の単離同定
運動ニューロンの自然細胞死の起こる時期に著しく変動する遺伝子を単離し、SCDGFと命名した。この遺伝子はラット胎児で運動ニューロンの発生分化に重要な役割を担うnotochordおよびfloor plateで強く発現し、in vitroで増殖活性を持つことを示した。さらに、SCDGFに相同な遺伝子を検索し、新たな遺伝子を単離し、SCDGF-Bと名付けた。SCDGF-Bはin vitroで増殖活性を持つが、SCDGFと異なり成ラットの脊髄のうち運動ニューロンでのみ発現していることが明らかとなった。
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Research Products
(5 results)
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[Publications] Ui-Tei K.: "Calmodulin-dependent and -independent apoptosis in cells of a Drosophila neuronal cell line."Apoptosis. 5. 133-140 (2000)
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[Publications] Ui-Tei K.: "Sensitive assay of RNA interference in Drosophila and chinese hamster cultured cells using firefly luciferase gene as target."FEBS Lett. 479. 79-82 (2000)
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[Publications] Hamada T.: "A novel gene derived from developing spinal cords, SCDGF, is a unique member of the PDGF/VEGF family."FEBS Lett. 475. 97-102 (2000)
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[Publications] Hamada T.: "Molecular cloning of SCDGF-B, a novel growth factor homologous to SCDGF/PDGF-C/ fallotein."Biochem Biophys Res Commun. 280. 733-737 (2001)
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[Publications] Nagano M.: "CDK inhibitors suppress apoptosis induced by chemicals and by excessive expression of a cell death gene, reaper, in Drosophila cells."Apoptosis. (in press).
