2000 Fiscal Year Annual Research Report
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12213050
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
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| Research Institution | Kanazawa University |
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Principal Investigator |
村上 清史 金沢大学, がん研究所, 教授 (90019878)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
林 直之 金沢大学, がん研究所, 助手 (50253456)
野村 孝弘 金沢大学, がん研究所, 助手 (80115261)
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| Keywords | HBV X蛋白 / RNAポリメラーゼ / TFIIF / RAP40 / RMP / テロメラーゼ活性 |
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| Research Abstract |
1.HBxの核内標的であるRPB5のN端側は、PolIIの下顎に突出した部分に当たり、HBx結合部位やRMP結合部位を含む。今回転写開始と伸長に関わるTFIIFとPolIIの会合にRPB5が関与する可能性を検討した。その結果、TFIIF複合体のRAP30がRPB5と特異的に結合し、RAP30の中央部(aa101-170)とRPB5のexposed domainのC端側(aa47-120)がRAP30結合に必要であった。In vivo及びin vitroでRAP30中央部を全てアラニン置換でスキャンし、RPB5結合能に必須な残基としてY124とQ131を特定した。培養細胞中でこれらの変異RAP30を含むTFIIFは、内在性PolIIと会合できず、RPB5のRAP30結合部の過剰発現は野生型TFIIとPolIIとの会合を阻害した。これらの結果から、PolIIの中でRPB5とRAP30との直接的な結合が、PolIIとTFIIFとの会合に必須の役割を果たしていると結論した(J.Biol.Chem.,in press)。2.HBxの機能的な拮抗因子RMPの細胞内局在を支配するシグナルの検討を行った。RMPのC端側のNLSと、新たに見い出したcoiled-coilドメインが細胞質局在シグナル(CLS)としてRMPの細胞内の局在性を支配することを見い出した(投稿準備中)。3.昆虫細胞系を用いて、組み換え型hTERT発現バキュロウイルスの効率的な増殖とFLAG-hTERTの高発現系を検討した。この精製法の確立により、in vitroで精製hTERTとhTRの2成分のみによるテロメラーゼ活性の再構成に成功した。更にこの系では、テロメラーゼ活性欠損の細胞抽出液が再構成テロメラーゼ活性を数十倍促進させることを見い出した(J.Biol.Chem.,275:22568-22573,2000)。
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Research Products
(7 results)
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[Publications] S.W.Kee, et al.: "Human Hepatitis B Virus X protein is a possible mediator of hypoxia induced angiogenesis in hepatocellular carcinoma."Biochem.Res.Communs.. 268. 456-461 (2000)
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[Publications] K.Masutomi, et.al,.: "Teromerase Activity Reconstituted in Vitro with Purified Human Teromerase Reverse Transcriptase and Human Teromerase RNA Component."J.Biol.Chem.. 275. 22568-22573 (2000)
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[Publications] Qin,W., et al.: "Mutational Analysisof the Structure and Functions of Hepatitis C Virus RNA-dependent RNA polymerase."Hepatol.. (in press). (2001)
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[Publications] Wei,W. et al.: "Direct interaction between the subunit RAP30 of TFIIF and RNA polymeras subunit5 (RPB5) which contributes to the association between TFIIF and RNA polymerase II."J.Biol.Chem. (in press). (2001)
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[Publications] Dorjsuren,D., et al.: "B型肝炎ウイルス(HBV)Xタンパクに拮抗する新規タンパクRMP。"実験医学. 18. 1137-1141 (2000)
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[Publications] 増富健吉: "昆虫細胞発現系を用いたヒトテロメアーゼ逆転写酵素(hTERT)の発現・精製。"バイオインダストリー. 17. 35-42 (2000)
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[Publications] 村上清史: "ヒトテロメアーゼ逆転写酵素(hTERT)の発現・精製とヒトテロメアーゼ活性の試験管内の再構成。"教育通信. (印刷中). (2001)
