2003 Fiscal Year Annual Research Report
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12213050
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| Research Institution | Kanazawa University |
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Principal Investigator |
村上 清史 金沢大学, がん研究所, 教授 (90019878)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
林 直之 金沢大学, がん研究所, 助手 (50253456)
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| Keywords | HBV X蛋白 / RNAポリメラーゼ / RPB5 / RMP / HBVレプリコン / 転写修飾 / テロメラーゼ |
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| Research Abstract |
HBV X蛋白(HBx)は細胞質及び核に存在し、宿主の多様な因子との相互する多機能制御蛋白である。HBV関連肝細胞がんの発症にHBxの関与が示唆されているが、その作用実態は明らかでない。HBxと宿主の標的因子及び拮抗因しの機能解析を行なった。得られた結果は、1)HBxの機能解析を目的として21種の集約型アラニン置換(cm)変異からなるライブラリーを作成した。このライブラリーを用いてトランス活性化とcoactivator活性を測定した結果、両者は共に、N端の負の制御領域を必要とせず、coactivatorドメイン内の2つの領域が必要であった。2)HBVレプリコン系を用いて、HBxのHBV複製への影響を検討した。HBxの欠損でHBV複製は約1/3に低下した。この低下は、異所性HBxによりトランス相補性された。HBxのcmライブラリーを用いたスキャンによって、HBxのcoactivator活性に必要な領域がHBV複製促進にも必要であり、HBV複製昂進へのHBxの役割が転写段階の機能による可能性が強く示唆された。3)RPB5の中央部のアラニン残基置換ライブラリーを作成し、それらの因子の相互作用に必要な領域・残基の限定を進めている。4)HBxに拮抗するRMPの結合パートナーを酵母twohybrid法で探索した。その結果、DNAメチル化酵素(Dnmt1)の結合因子DMAP1とRMP自体が選択された。in vivo及びin vitroでDMAP1とRMPのcoiled coil(CC)ドメインとの特異的な結合が示された。chromatin共沈法で、DMAP1はRMPのCCドメインに依存して、プロモータ領域にリクルートされた。4。Anti-TERT mAbを用いてヒト初代細胞で微弱なhTERTの発現とテロメラーゼ活性を認め、S期依存的な発現と活性を確認した。
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[Publications] Hirano, M., et al.: "Direct Interaction between nucleolin and Hepatitis C Virus NS5B"J.Biol.Chem.. 278. 5109-5115 (2003)
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[Publications] Wei, W., et al.: "Interaction with general transcription factor IIF(TFIIF) is required for the suppression as activated transcription by RPB5-mediating protein RMP."Cell Research. 13. 111-120 (2003)
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[Publications] Masutomi, K., et al.: "Telomerase maintains telomere structure in normal human cells"Cell. 114(2). 241-253 (2003)
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[Publications] Kyo, S., et al.: "Significance of immunological detection of human telomerase reverse transcriptase : re-evaluation of expression and localization of human telomerase transcriptase."Am.J.Pathol.. 163(3). 859-867 (2003)
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[Publications] Shimakami, T., et al.: "Effect of Interaction between Hepatitis C Virus NS5A and NS5B on the Hepatitis C Virus Replicon."J.Virol.. 78. 2738-2748 (2004)
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[Publications] Moon, EJ, et al.: "Hepatitis B Virus X protein induces angiogenesis by stabilizing hypoxia-inducible factor-1alpha."FASEB J.. 18(2). 382-384 (2004)
