2001 Fiscal Year Annual Research Report

細胞増殖抑制分子p27の分解機構の研究

Research Project

Project/Area Number	12213097
Research Institution	Kyushu University
Principal Investigator	中山敬一九州大学, 生体防御医学研究所, 教授 (80291508)
Keywords	p27 / Skp2 / ユビキチン化 / ノックアウトマウス / RING finger
Research Abstract	我々は、サイクリンEやp27^<Kip1>のユビキチン依存性をつかさどるユビキチンリガーゼのコンポーネントSkp2をクローニングし、そのノックアウトマウス作製した。リンパ球は、細胞増殖を誘導するとp27^<Kip1>が速やかに分解されS期へ進入する。Skp2ノックアウトマウスのリンパ球は、無刺激状態では野生型に比し、p27^<Kip1>が過剰に蓄積しているが、細胞増殖刺激後の速やかな分解は野生型と同様に観察される。ところがS期〜G2期にかけて正常では見られないp27^<Kip1>の蓄積が開始され、最終的に細胞周期が停止した。このことから、p27^<Kip1>の分解はSkp2のみに依存しているのではなく、特にG0-G1移行期における急速なp27^<Kip1>の分解はSkp2以外の分解機構が存在することが示唆された。 p27^<Kip1>は、ユビキチン化酵素であるE1及びE2とウサギ網状赤血球抽出液中で反応させることによってユビキチン化されることを発見した。そこで、ウサギ網状赤血球抽出液を種々のカラムクロマトグラフィーを組み合わせて分離しp27^<Kip1>をユビキチン化する分画を精製した。精製が進んだ段階で電気泳動によって分けられたタンパク質をゲルから切り出し、蛋白分解酵素で消化後、そのペプチド断片を逆相クロマトグラフィーで分離し、アミノ酸シークエンサー又はタンデムマススペクトロメトリーによってその部分アミノ酸配列を決定した。得られたタンパク質は2種類あり、それらの分子量は約140kDa及び約50kDaであった。部分アミノ酸配列よりdatabase検索・RT-PCR法などを用い、その全長cDNA及び全アミノ酸配列を得た。これらのタンパク質は、いずれも明らかな機能は示されてはいない新規タンパク質であった。約140kDaのタンパク質はそのC末端にRING finger領域を持ち、ユビキチン化に関与することが示唆される。

Research Products
(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] Hara, T.: "Degradation of p27^<Kip1> at the G0-G1 transition mediated by a Skp2-independent ubiquitination pathway"J. Biol. Chem.. 276. 48937-48943 (2001)
[Publications] Malek, N. P.: "A mouse knock-in model exposes sequential proteolytic pathways that regulate p27^<Kip1> in G1 and S phase"Nature. 413. 323-327 (2001)
[Publications] Tsukiyama, T.: "Down-regulation of p27^<Kip1> expression is required for development and function of T cells"J. Immunol.. 166. 304-312 (2001)
[Publications] Nagahama, H.: "Spatial and temporal expression patterns of the cyclin-dependent kinase (CDK) inhibitors p27^<Kip1> and p57^<Kip2> during mouse development"Anat. Embryol.. 203. 77-87 (2001)
[Publications] Minamishima, A. Y: "Recovery of liver mass without proliferation of hepatocytes after partial hepatectomy in Skp2-deficient mice"Cancer Res.. 62. 995-999 (2002)
[Publications] Miyamoto, A.: "Increased proliferation of B cells and autoimmunity in mice lacking protein kinase Cδ"Nature. (in press). (2002)

2001 Fiscal Year Annual Research Report

細胞増殖抑制分子p27の分解機構の研究

Principal Investigator

中山 敬一 九州大学, 生体防御医学研究所, 教授 (80291508)

Research Products

[Publications] Hara, T.: "Degradation of p27^<Kip1> at the G0-G1 transition mediated by a Skp2-independent ubiquitination pathway"J. Biol. Chem.. 276. 48937-48943 (2001)

[Publications] Malek, N. P.: "A mouse knock-in model exposes sequential proteolytic pathways that regulate p27^<Kip1> in G1 and S phase"Nature. 413. 323-327 (2001)

[Publications] Tsukiyama, T.: "Down-regulation of p27^<Kip1> expression is required for development and function of T cells"J. Immunol.. 166. 304-312 (2001)

[Publications] Nagahama, H.: "Spatial and temporal expression patterns of the cyclin-dependent kinase (CDK) inhibitors p27^<Kip1> and p57^<Kip2> during mouse development"Anat. Embryol.. 203. 77-87 (2001)

[Publications] Minamishima, A. Y: "Recovery of liver mass without proliferation of hepatocytes after partial hepatectomy in Skp2-deficient mice"Cancer Res.. 62. 995-999 (2002)

[Publications] Miyamoto, A.: "Increased proliferation of B cells and autoimmunity in mice lacking protein kinase Cδ"Nature. (in press). (2002)

中山敬一九州大学, 生体防御医学研究所, 教授 (80291508)