WT1特異的不死化細胞傷害性T細胞クローンを用いたヒト白血病の免疫遺伝子治療

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12217104
• Research Institution: Ehime University
• Principal Investigator: 安川 正貴 愛媛大学, 医学部, 助教授 (60127917)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 薬師神 芳洋 愛媛大学, 医学部, 助手 (30294797) ; 酒井 郁也 愛媛大学, 医学部, 助手 (10205700)
• Keywords: 白血病 / 細胞傷害性T細胞 / 免疫療法 / 遺伝子治療 / WT1 / HLA

Research Abstract

白血病に対する免疫遺伝子治療の開発の目的で研究を遂行し、以下の結果が得られた。
転写因子であるWT1は多くの白血病細胞で高発現されているが正常細胞にはほとんど発現されていないことから、WT1は白血病免疫療法の理想的標的抗原と考えられた。まず、日本人の60%以上が陽性であるHLA-A24(HLA-A*2402)のアンカーモチーフを有する9merのWT1由来ペプチドを作製した。健常人末梢血単球から誘導した樹状細胞にWT1ペプチドをパルスし、CD8陽性T細胞を繰り返し刺激した。その結果、WT1ペプチド特異的HLA-A24拘束性CD8陽性細胞傷害性T細胞(CTL)クローンを樹立し、TAK-1と名付けた。TAK-1はWT1を高発現している白血病細胞のうちHLA-A24陽性細胞に対してのみ細胞傷害性を示したが、HLA-A24陰性ならびにWT1発現を認めないリンパ腫由来細胞に対しては細胞傷害性を示さなかった。また、線維芽細胞や末梢血リンパ球などの正常細胞は、HLA-A24の有無に関わらず細胞傷害性を受けず、TAK-1は正常骨髄細胞増殖にも影響を与えなかった。次に、WT1特異的CTLクローンにHerpesvirus saimiri(HVS)を接種し、HVSによってTAK-1を不死化させた。不死化TAK-1は、本来の機能を維持したまま長期間の培養が可能であった。さらに、Herpes simplex virus thymidine kinase(TK)遺伝子をレトロウイルスベクターを用いて不死化TAK-1に導入した。現在、TK遺伝子導入不死化CTLの生体内での白血病細胞増殖抑制効果とガンシクロビルによる人為的排除を、ヒトがん細胞移入SCIDマウスの実験系で検討中である。
本研究から得られた結果は、白血病に対する新たな免疫遺伝子治療の開発に結びつくものと考えられ、臨床応用を目指した検討を進めている。

Research Products

• [Publications] Hasegawa A.,Yasukawa M., et al.: "Transcriptional down-regulation of CXCR4 induced by impaired association of transcription regulator YY1 with c-Myc in human herpesvirus 6-infected cells"Journal of Immunology. 166. 1125-1131 (2001)
• [Publications] Arai J.,Yasukawa M., et al.: "Identification of human telomerase reverse transcriptase-derived peptides which induce HLA-A24-restricted anti-leukemia cytotoxic T lymphocytes"Blood. (in press). (2001)
• [Publications] Arai J.,Yasukawa M., et al.: "Stromal cells in lymph nodes attract B-lymphoma cells via production of stromal cell-derived factor-1"European Journal of Haematology. 64. 323-332 (2000)
• [Publications] Yasukawa M., et al: "Analysis of HLA-DRB1 alleles in Japanese patients with chronic myelogenous leukemia"American Journal of Hematology. 63. 99-101 (2000)
• [Publications] Yasukawa M., et al.: "Granule exocytosis, and not Fas/Fas ligand system, is the main pathway of cytotoxicity mediated by alloantigen-specific CD4+ as well as CD8+ cytotoxic T lymphocytes in humans"Blood. 95. 2352-2355 (2000)
• [Publications] Ohminami H.,Yasukawa M., et al.: "HLA class I-restricted lysis of leukemia cells by a CD8+ cytotoxic T-lymphocyte clone specific for WT1 peptide"Blood. 95. 286-293 (2000)
• [Publications] 安川正貴: "白血病・リンパ腫・骨髄腫"押味和夫 編集 中外医学社. 81-98 (2000)
• [Publications] 安川正貴: "血液疾患診療マニュアル"池田康夫,押味和夫,朝長万左男,堀田知光 編集 日本医師会. 311-312 (2000)