2000 Fiscal Year Annual Research Report
ターゲッティング能を有したアデノウイルスベクターシステムの開発
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12217162
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| Research Institution | National Institute of Health Sciences |
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Principal Investigator |
水口 裕之 国立医薬品食品衛生研究所, 生物薬品部, 研究員 (50311387)
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| Keywords | 遺伝子治療 / アデノウイルスベクター / ファイバー / ターゲッティング |
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| Research Abstract |
アデノウイルスベクターは感染域が広く、多くの種類の細胞に遺伝子導入が可能であるが、本ベクターの問題点のひとつに、ベクターの感染域に組織特異性がないことや、アデノウイルス受容体(coxsackievirus and adenovirus receptor;CAR)の発現がない細胞には感染できないことがあげられる。そこで本研究では、任意の挿入したい外来ペプチドに相当するDNAをウイルス表面タンパク質のファイバーDNA領域に導入し、CARだけでなく、挿入したペプチドに親和性のある細胞表面上の受容体(タンパク質)を認識しても感染できるファイバーミュータントアデノウイルスベクターシステムの開発を行った。本年度は以下の結果を得た。
1)アデノウイルス全ゲノムを含むベクタープラスミドのファイバータンパク質のHIloopをコードしている遺伝子配列部分に、ユニークな制限酵素部位を挿入し、任意の挿入したい外来ペプチドに相当する合成オリゴDNAを、ワンステップのin vitroライゲーションでアデノウイルスDNAに導入できるシステムを開発した。
2)モデルとして作製したαvβ3あるいはαvβ5インテグリンとの結合能を有するRGD配列をファイバーに導入したアデノウイルスベクターが、野生型のファイバーを有したベクターと比較し、アデノウイルス受容体の発現が乏しい種々の細胞(癌細胞、マウス由来細胞、血管平滑筋細胞、血球系細胞など)において10-1000倍の遺伝子導入活性を示すことを明らかにした。
現在RGD配列をファイバーに導入したアデノウイルスベクターを用いた癌遺伝子治療モデル研究を行うと共に、真にターゲッティング能を有したベクターシステムの開発にも焦点を当てて、研究を進めている。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] H.Mizuguchi,N.Koizumi,T.Hosono,N.Utoguchi,Y.Watanabe,M.A.Kay,T.Hayakawa.: "A simplified system for constructing recombinant adenoviral vectors containing heterologous peptides in the HI loop of their fiber knob"Gene Ther.. (in press).
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[Publications] N.Okada,Y.Tsukada,S.Nakagawa,H.Mizuguchi,K.Mori,T.Saito,T.Fujita,A.Yamamoto,T.Hayakawa,T.Mayumi.: "Efficient gene delivery into dendritic cells by fiber-mutant adenovirus vectors."Biochem.Biophys.Res.Commun.. (in press).
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[Publications] 水口裕之,早川堯夫: "アデノウイルスベクター作製技術と次世代ベクターへの応用-ファイバーミュータントアデノウイルスベクターを中心として-"日本臨床. 58. 1544-1553 (2000)
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[Publications] H.Mizuguchi,Z.Xu,A.Ishii-Watabe,E.Uchida,T.Hayakawa: "IRES-dependent second gene expression is significantly lower than cap-dependent first gene expression in a bicistronic vector."Mol.Ther.. 1. 376-382 (2000)
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[Publications] Y.Nagayama,E.Nishihara,H.Namba,H.Yokoi,M.Hasegawa,H.Mizuguchi,T.Hayakawa,H.Hamada,S.Yamashita,M.Niwa.: "Targeting the replication of adenovirus to p53-defective thyroid carcinoma with a p53-regulated cre/loxP system."Cancer Gene Ther.. 8. 36-44 (2001)
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[Publications] H.Mizuguchi,T.Hosono,,T.Hayakawa: "Long-term replication of Epstein-Barr virus-derived episomal vectors in the rodent cells."FEBS Letter. 472. 173-178 (2000)
