2000 Fiscal Year Annual Research Report
心血管系の負荷応答と病態形成:遺伝子転写シグナルと病態生理に基づく治療戦略の確立
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12307015
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
永井 良三 東京大学, 医学部・附属病院, 教授 (60207975)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
高橋 利之 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (40236302)
杉浦 清了 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (10272551)
小室 一成 千葉大学, 医学部・附属病院, 助教 (30260483)
世古 義規 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (30240708)
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| Keywords | 転写因子 / サイトカイン / 虚血再灌流 / ミオシン軽鎖 / BTEB2 / Klotho 遺伝子 |
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| Research Abstract |
1.圧負荷ストレスに関してはラット大動脈縮窄モデルを作成し心肥大形成の経時変化を確認した。各週令の組織よりRNAを抽出しDNA Chipを用いて遺伝子発現レベルを解析、これまでに報告された結果との相違点について検討している。2.虚血再灌流については培養心筋細胞に低酸素・再酸素化刺激を加えた後培養液上清をゲル濾過にかけ各分画の生理活性を1)血管平滑筋収縮作用2)心筋カルシウムトランジエントに対する作用によって評価した。活性分画より物質の単離を試みている。3.サイトカインストレスに関してはTNF-αついて検討した。TNF-αを加えて培養した心筋細胞よりRNAを抽出、活性化されるものをDNA Chipにより検出したが持続的に発現する転写因子は現在発見されていない。4.ミオシン軽鎖については家族性肥大型心筋症において報告された突然変異のうち筋の短縮速度を増加させるとされるもの4種類、アクチンとの相互作用部位に変異を持つもの1種類のcDNAを作製した。これをアデノウイルスベクターを用いて単離心筋細胞内で発現させる予定である。また単離心筋細胞の機能評価のために単一心筋細胞の発生張力とカルシウムトランジエント同時測定システムを開発した。5.転写因子BTEB2とGal4のNNA結合ドメインの融合タンパクをを発現するよう形質転換した酵母に血管のcDNAライブラリーを加え培養を行った。陽性クローンからプラスミドを回収し絞り込みを行っている。
6.NOSの発現レベルおよび活性、さらにNO産生を測定するシステムを完成した。Klotho遺伝子を発現するCOS細胞に対しサイトカイン刺激を加え反応を解析している。
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[Publications] Eto Y, et al.: "Calcineurin is activated in rat hearts with physiological left ventricular hypertro induced by voluntary exercise training"Circulation. 101 May. 2134-2137 (2000)
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[Publications] Yonekura K, et al.: "Inhibition of carnitine synthesis modulates protein contents of the car sarcoplasminc reticulum Ca2+-ATPase and hexokinase type I in rat hearts myocardial infarction"Bas Res Cardiol. 95 5. 343-348 (2000)
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[Publications] Zhu W, et al.: "Ca^<2+>/calmodulin-depenedent kinase II and calcineurin play critical roles in endothelin-1-induced cardiomyocyte hypertrophy."J Biol Chem. 275. 15239-45 (2000)
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[Publications] Aikawa R, et al.: "Insulin prevents cardiomyocytes from oxidative stress-induced apoptosis thractivation of P13 Kinase/Akt."Circulation. 102. 2873-9 (2000)
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[Publications] Shimoyama M. et al.: "Calcineurin inhabitor attenuates the development and induces the regressio cardiac hypertrophy in rats with salt-sensitive hypertension."Circulation. 102. 1996-2004 (2000)
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[Publications] Wakimoto K, et al.: "Targeted disruption of Na^+/Ca^<2+>exchanger gene Leads to cardiomyocyte apoptosis and defects in heartbeat."J Biol Chem. 275. 36991-8 (2000)
