2000 Fiscal Year Annual Research Report
骨髄間質細胞由来の心筋細胞を用いた心不全治療法の確立
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12307016
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| Research Institution | Keio University |
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Principal Investigator |
小川 聡 慶應義塾大学, 医学部, 教授 (90124940)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
加藤 隆弘 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (60276219)
高橋 栄一 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (00276247)
福田 恵一 慶應義塾大学, 医学部, 講師 (20199227)
冨田 雄一 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (00296568)
伯野 大彦 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (80286476)
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| Keywords | 心筋細胞 / 再生医学 / 骨髄細胞 / 細胞分化 / 細胞移植 / 心不全 |
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| Research Abstract |
(1)CMG細胞のカテコラミン受容体の発現:
最終分化誘導前および5-Azacytidineによる分化誘導後1-6週のCMG細胞よりRNAを抽出した。マス心臓を陽性対照にカテコラミンα1受容体(α1A、α1B、α1D)およびβ受容体(β1、β2)のRT-PCRを行った分化誘導前および誘導後2週のCMG細胞をフェニレフリン(α1 agonist)にて刺激し、ERK1/2の活性化を定した。CMG細胞におけるカテコラミン受容体の発現を解析するとα1受容体の3種のサブタイプの内、1A、α1B、α1Dすべてが最終分化誘導前より発現していた。さらに、CMG細胞をフェニレフリンで刺激るとMAPKの1種であるERK1/2の活性化が容量、時間依存性に観察され、この活性化はα1遮断薬であるラゾシンにより抑制された。β受容体に関してはβ1受容体、β2受容体の両者が心筋細胞に分化誘導され後に発現された。CMG細胞をβ刺激薬であるイソプロテレノールで刺激すると細胞内cAMPの濃度が容量存性に増加していた。以上よりCMG細胞はカテコラミンα1、β1、β2受容体をmRNAレベルだけでなく白レベルでも発現しかつ生理機能を有していることが観察された。
(2)ミオシン軽鎖-2v遺伝子プロモーターとEGFPの組み換え遺伝子を用いた心筋細胞の単離:
心筋細胞特異的に発現するミオシン軽鎖-2v遺伝子のプロモーターにEnhanced Green Fluorescent Protein(EGFP-cDNA遺伝子を組み替えたプラスミドを作製した。この遺伝子組換えプラスミドとNeomycin耐性遺伝子プラスミドをCMG細胞に共遺伝子導入し、G418存在下に細胞を選別した。CMG細胞に5-azacytidineにより最終分化誘導を行い、心筋細胞に分化した細胞のみをFACSによりsortingを行ったところ、CMG細胞は完全な心筋細胞の分画にすることが可能となった。
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Research Products
(5 results)
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[Publications] T.Kato,M.Sano,K.Fukuda,S.Ogawa.Et al: "Calmodulin kinase-II,-IV and calcineurin are involved in leukemia inhibitory factor-induced cardiac hypertrophy in rats."Circ.Res.. 87. 937-945 (2000)
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[Publications] H.Kodama,K.Fukuda,J.Pan,M.Murata,S.Ogawa.Et al.: "Significance of Raf-1/MEK/ERK cascade compared with JAK/STAT and PI3-K pathway in gp130-mediated Cardiac Hypertrophy."AM.J.Physiol.. 279. H1635-H1644 (2000)
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[Publications] K.Fukudsa,S.Makino,S.Ogawa.Et al.: "A Cardiomyocyte Cell Line To Overcome Fibrotic Myocardium."Microcirculation annual. 16. 17-18 (2000)
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[Publications] M.Sano,K.Fukuda,H.Kodama,S.Tahara,S.Ogawa.Et al: "Autocrine/Paracrine Secretion of IL-6 Family Cytokines Causes Angiotensin II-Induced Delayed STAT3 Activation."Biochem.Biphys.Res.Com.. 269. 798-802 (2000)
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[Publications] M.Sano,K.Fukuda,H.Kodama,A.Yamane,S.Ogawa.Et al: "IL-6 Family of cytokines mediate angiotensin II-induced cardiac hypertrophy in rodent cardiomyocytes."J.Biol.Chem. 275. 29717-29723 (2000)
