2002 Fiscal Year Annual Research Report
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12308033
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
藤木 幸夫 九州大学, 理学研究院, 教授 (70261237)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
原野 友之 九州大学, 理学研究院, 助手 (80037275)
田村 茂彦 九州大学, 理学研究院, 助教授 (90236753)
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| Keywords | ペルオキシソーム / ペルオキシソーム欠損症 / CHO変異細胞 / ペルオキシソーム形成因子 / 病因遺伝子 / 膜タンパク質 / AAAファミリー / 蛋白質-蛋白質間相互作用 |
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| Research Abstract |
1)PTS2レセプターPex7pの機能、機能不全、細胞内局在について、独自に分離したpex7CHO変異細胞ZPG207およびPEX7異常RCDP患者由来線維芽細胞を用いて検討した。PTS2およびPex5pLとの結合にはほぼ全長が必要であること、RCDP患者中現在までに報告されている3種の変異(L292ter, G217R, A218V)およびZPG207由来Pex7p-W221terはいずれもPTS2およびPex5pLとの結合活性を失うことを見出した。さらにPex7pは細胞質に大半は存在するが、一部はPex5pL依存的にペルオキシソームマトリックス内に局在化することから、Pex5pと同様にshuttlingr receptorとして機能しているものと結論した。
2)先にクローニングした相補性群D群(欧米9群)のペルオキシソーム形成異常症原因遺伝子PEX16に関し、新たなZellwger症候群2患者の変異解析を行い、両者ともにexon10-skippingを引き起こす同じ変異(IVS10+2T->C)を見出した。
3)従来、相補性群11群(PEX7障害性)CHO変異細胞はZPG207のみであったが、新たな変異細胞の分離へ向けたスクリーニングにより、2種のpex7変異細胞ZPEG227およびZPEG231の単離に成功、ZPEG227はPex7p-W158terを有していることを明らかにした。同様に、新たな表現型を示すpex2変異細胞ZPEG309を単離した。
4)ペルオキシソームの膜アセンブリーに必須なPex16pのペルオキシソーム膜局在化シグナルを解明した。また、ペルオキシソームの増殖・分裂に関わるペルオキシン、Pex11pαおよびPex11pβに加えてPex11pγのクローニングにも成功した。
5)長年不明であった相補性群A群(欧米8群)の相補遺伝子の解明を試み、CHO変異細胞ZPG167およびヒト腎臓DNAライブラリーを用いた機能相補活性スクリーニング法により、ついに新規遺伝子PEX26のクローニングに成功した。さらに同相補性群NALD患者由来線維芽細胞に対してもPEX26はペルオキシソームの形成を回復させ、かつ患者PEX26遺伝子に変異を認めたことから、相補遺伝子はPEX26と結論した。これで、12の相補性群に分類されるペルオキシソーム形成異常症のすぺての病因遺伝子が解明されたことになる。
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Research Products
(8 results)
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[Publications] Mukai, S.: "Intracellular Localization, Function, and dysfunction of the peroxisome-targeting signal type 2 receptor, Pex7p, in mammalian cells"The Journal of Biological Chemistry. 277. 9548-9561 (2002)
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[Publications] Shimozawa, N.: "A novel aberrant splicing mutation of the PEX16 gene in two patients with Zellweger syndrome"Biochemical and Biophysical Research Communications. 292. 109-112 (2002)
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[Publications] Yanago, E.: "Isolation of Chinese hamster ovary cell pex mutants : two PEX7-defective mutants"Biochemical and Biophysical Research Communications. 293. 225-230 (2002)
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[Publications] Akiyama, N.: "A Novel pex2 mutant : catalase-deficient but temperature-sensitive PTS1 and PTS2 import"Biochemical and Biophysical Research Communications. 293. 1523-1529 (2002)
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[Publications] Saito, M.: "Molecular cloning of Chinese hamster ceramide glucosyltransferase and its enhanced expression in peroxisome-defective mutant Z65 cells"Archives of Biochemistry and Biophysics. 403. 171-178 (2002)
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[Publications] Honsho, M.: "The membrane biogenesis peroxin Pex16p : Topogenesis and functional roles in peroxisomal membrane assembly"The Journal of Biological Chemistry. 277. 44513-44524 (2002)
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[Publications] Tanaka, A.: "cDNA cloning and characterization of the third isoform of human peroxin Pex11p"Biochemical and Biophysical Research Communications. 300. 819-823 (2003)
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[Publications] Matsumoto, N.: "The novel pathogenic peroxin Pex26p recruits the Pex1p-Pex6p AAA-ATPase complexes to peroxisomes"Nature cell Biology. (in press). (2003)
