2001 Fiscal Year Annual Research Report
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12308039
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
金子 武嗣 京都大学, 医学研究科, 教授 (90177519)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
瀧 公介 京都大学, 医学研究科, 日本学術振興会・特別研究員
古田 貴寛 京都大学, 医学研究科, 助手 (60314184)
玉巻 伸章 京都大学, 医学研究科, 助教授 (20155253)
工藤 基 滋賀医科大学, 教授 (80108141)
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| Keywords | 中枢神経系 / 局所神経回路 / 投射ニューロン / インターニューロン / トランスジェニックマウス / ウィルスベクター / ゴルジ染色様標識 / 細胞内染色 |
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| Research Abstract |
1.大脳皮質出力ニューロンを逆行性に細胞体・樹状突起をGolgi染色様に標識する方法により、前もって出力ニューロンを標識したラットの大脳皮質スライス標本を作成した。微小ガラス電極を各層のニューロンに刺入し、基本的な電気的性質を記録してニューロンを分類し、Biocytinを注入した。スライス標本を固定した後、組織学的な検索として免疫蛍光法を用いてBiocytinを注入したニューロンが興奮性あるいは抑制性であるか検討した。次に、Biocytinを注入したニューロンと特にその出力である神経軸索をAvidn-biotinylated peroxi-dase complex法によって青黒色に染色し、逆行性に標識された出力ニューロンの樹状突起をPeroxidase anti-peroxi-dase酵素免疫染色法で赤く染色し、1個のニューロンから一群の大脳皮質投射ニューロンヘの連絡を調べた。その結果、興奮性のIII層錐体ニューロンの出力はV層の皮質脊髄投射錐体ニューロンヘ多く入力しているが、VI層の皮質視床投射錐体ニューロンヘはその4分の1しか入力していないことを見出し報告した。さらに、V1層の錐体ニューロンヘの入力を調べII/III層及びV層の錐体ニューロンからの入力は少ないが、IV層・VI層からの入力が多いことを見いだしており、報告をまとめている。
2.中枢神経系の投射ニューロンをアデノウィルスベクターあるいはSindbisvirusベクターに感染させ、膜移行シーグナルを導入したGrcen fluorescent protein(pGHP)を発現させ、Golgi染色様に標識することに成功した。
3.GABA作動性のインターニューロンをGolgi染色様に染色する手法を、トランスジェニックマウスを利用して作ろうとしている。現在、GABAニューロンのマーカーであるParvalbuminとCalretininというカルシウム結合タンパク質の遺伝子をBACを用いてクローニングしている。Calretininトランスジェニックマウスは作成済みで、pGFPの発現特異性を検討している。
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[Publications] Takeshi Kaneko: "Immunohistochemical localization of candidates for vesicular glutamate transporters in the rat brain"The Journal of Comparative Neurology. 444. 39-62 (2002)
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[Publications] Takahiro Furuta: "In vivo transduction of central neurons using recombinant Sindbis virus : Golgi-like labeling of dendrites and axons withmambrane-targeted fluorescent proteins"The Journal of Hlstochemistry & Cytochemistry. 49. 1497-1507 (2001)
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[Publications] Nobuaki Tamamaki: "Radial glia is a progenitor of neocortical neurons in the developing cerebral cortex"Neuroscience Research. 41. 51-60 (2001)
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[Publications] Fumino Fujiyama: "Immunocytochemical localization of candidates for vvesicular glutamate transporters in the rat cerebral cortex"The Journal of Comparative Neurology. 435. 379-387 (2001)
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[Publications] Kazuhiro Nakamura: "Prostaglandin EP3 receptor protein in serotonin and catecholamine cell groups : A double immunofluorescence study in the rat brain"Neuroscience. 103. 763-775 (2001)
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[Publications] Nobuaki Tamamaki: "Cell migration from the corticostriatal angle to he basal telencephalon in rat embryos"NeuroReport. 12. 775-780 (2001)
