薬物・環境物質の体内動態を制御するトランスポーター遺伝子の同定と遺伝的多型の解明

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12357016
• Research Institution: Kyorin University
• Principal Investigator: 遠藤 仁 杏林大学, 医学部, 教授 (20101115)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 細山田 真 杏林大学, 医学部, 講師 (00291659) ; 武田 理夫 杏林大学, 医学部, 講師 (40255401) ; 金井 好克 杏林大学, 医学部, 助教授 (60204533) ; 稲富 淳 杏林大学, 医学部, 助手 (00311960) ; 車 碩鎬 杏林大学, 医学部, 助手 (50276200)
• Keywords: アニオントランスポーター / 胎盤 / エストロン硫酸 / デヒドロエピアンドロステロン硫酸 / パラアミノ馬尿酸 / 一塩基変異遺伝子多型 / イントロン / エクソン

Research Abstract

1.ヒト胎盤に発現する有機アニオントランスポーターの第4のメンバーをESTデータベースの検索により同定した。OAT4は551アミノ酸残基をもち12回膜貫通型構造が予想された。hOAT4は他のOATファミリーと38〜43%のアミノ酸配列の一致があった。アフリカツメガエル卵母細胞発現系でOAT4はエストロン硫酸(Km=1.01μM)やデギドロエピアンドロステロン硫酸(Km=0.63μM)をNa^+非依存性、高親和性に輸送した。またオクラトキシンAやPAHの輸送も認められた。OAT4によるエストロン硫酸の輸送は様々な硫酸抱合体により抑制を受けた。すなわちp-ニトロフェニル硫酸、α-ナフチル硫酸、β-エストラジオール硫酸、4-メチルウンベリフェリル硫酸などである。反対にグルクロン酸縫合体はOAT4によるエストロン硫酸の輸送に殆ど影響を与えななかった。ノーザンブロティングでは胎盤と腎臓に発現が認められ、胎盤に発現する有機アニオントランスポーターとしては最初のメンバーであり、有害なアニオン性物質の胎児からの排出に寄与しているものと予想される。
2.ヒト腎臓において近位尿細管の分泌能を示す試薬であるパラアミノ馬尿酸を輸送し、抗生物質、利尿薬、消炎鎮痛薬などのアニオン性薬物の尿中排泄にとって重要である有機アニオントランスポーターhOAT1の遺伝子について、日本人72名の抹消血より得られたゲノムのサンプルを用いてSNPsをスクリーニングし、SNPs部位の同定を行った。その結果hOAT1遺伝子でエクソン及びエクソンイントロンジャンクション近傍をスクリーニングした場合には、5′非翻訳領域に2ケ所のSNPsと1ケ所のvariant、イントロン5及び8にSNPs(intron SNPs)、およびエクソン6にアミノ酸変異を伴うcoding SNP(cSNPs)を新しく見出すことができた。

Research Products

• [Publications] Cha,S.H.,Sekine,T.,Kusuhara,H.,Yu,E.,Kim,J.Y.,Kim,D.Y.,Sugiyama,Y.,Kanai,Y.&Endou,H.: "Molecular cloning and characterization of multispecific organicanion transporter 4 expressed in the placenta."J.Biol.Chem.. 275. 4507-4512 (2000)
• [Publications] Okuda,T.,Haga,T.,Kanai,Y.,Endou,H.,Ishihara,T.and Katsura,I.: "Identification and characterization of high-affinity choline transporter."Nature Neuroscience. 3(2). 120-125 (2000)
• [Publications] Fukasawa,Y.,Segawa,H.,Kim,J.Y.,Chairoungdua,A.,Kim,D.K.,Endou,H.and Kanai,Y: "dentification and characterization of a Na+-independent neutral amino acid transporter which associates with the 4F2 heavy chain and exhibits selectivity for small neutral D-and L-amino acids."J.Biol.Chem.. 275(13). 9690-9698 (2000)
• [Publications] Kanai,Y.,Fukasawa,Y.,Cha,S.H.,Segawa,H.,Chairoungdua,A.,Kim,D.Y.,Matsuo,H.,Kim,JY.,Miyamo,K.,Takeda,E.and Endou,H.: "Transport properties of a system y+L neutral and basic amino acid transporter."J.Biol.Chem.. 275(27). 20787-20793 (2000)
• [Publications] Sekine,T.,Cha,S.H.,Endou,H: "The multispecific organic anion transporter (OAT) family."Pfluegers Arch-Eur.J.Physiol.. 440. 337-350 (2000)
• [Publications] Wada,W.,Tsuda,M.,Sekine,T.,Cha,S.H.,Kimura,M.,Kanai,Y.and Endou,H.: "Rat maltispecific organic anion transporter 1(rOAT1) transports zidovudne, acyclovir, and other antiviral nucleoside analogs."J.Pharmacol.Exp.Ther.. 294(3). 844-849 (2000)
• [Publications] Sekine,T.,Cha,H.S.and Endou,H.: "Control and Diseases of Sodium Dependent Transport Proteins and Ion Channels.(Edited by Y.suketa,E., Carofoli, M., Lazdunski, K., Mikoshiba, Y., Okada and E.M.Wright)"Elsvier Science B.V. 440 (2000)
• [Publications] Takeda,M.,Endou,H.: "Marssy & Glassock's textbook of Nephrology (Edited by S.G.Massry,R.J.Glassock)"Lippincott Williams & Wilkins. 2072 (2000)