2002 Fiscal Year Annual Research Report

葉緑体のRNAプロセス・翻訳系に関与するRNA結合性蛋白質の研究

Research Project

Project/Area Number	12440226
Research Institution	Nagoya City University
Principal Investigator	杉浦昌弘名古屋市立大学, 大学院・システム自然科学研究科, 教授 (80027044)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	櫻井宣彦名古屋市立大学, 大学院・システム自然科学研究科, 講師 (00255233) 森山昭彦名古屋市立大学, 大学院・システム自然科学研究科, 教授 (50145744) 谷本英一名古屋市立大学, 大学院・システム自然科学研究科, 教授 (90080283) 小保方潤一名古屋大学, 遺伝子実験施設, 助教授 (50185667) 續伯彦愛知学院大学, 情報社会政策学部, 教授 (60064896)
Keywords	葉緑体 / タバコ / シス配列 / 翻訳 / RNAエディティング / mRNA / Shine-Dalgarno配列 / in vitro系
Research Abstract	(1)翻訳シス配列とトランス因子の解析タバコ葉緑体の30種のmRNAは、Shine-Dalgarno配列が無く、代わりに特異的な蛋白因子が翻訳開始に必要である。我々の開発したin vitro翻訳系を用いてATP合成酵素サブユニットβのmRNAのシス配列を同定した.ついで,Shine-Dalgarno様の配列をもつリボソームタンパクS2のmRNAのシス配列を調べたところ,Shine-Dalgarno様配列が阻害的に働くことを見出した。このShine-Dalgarno配列を含む10ヌクレオチド領域が阻害しており、この領域を欠失または変異すると翻訳活性は約20倍に上昇することを示した。さらに葉緑体内では、この領域にトランス因子が結合することを明らかにした。 (2)RNAエディティング因子の単離と解析我々が開発した葉緑体RNAエディティング系を用いて、タバコ葉緑体のpsbE mRNAのシス配列を上流-20から-6ヌクレオチドの領域と決定した。シス配列の中央のヌクレオチドをP32で標識したmRNAを用いてUVクロスリンキング法で部位決定因子を同定し、56kDaのタンパク質であることを示した。この単離を各種クロマトグラフ法や沈殿法で進めているが,すぐ活性が無くなり,困難を極めている。一方、petB mRNAのシス配列の決定を進め、トランス因子の同定も同様の方法で行う予備実験をした。

Research Products
(7 results)

All Other

All Publications (7 results)

[Publications] Miyamoto, T.: "Recognition of RNA editing sites is directed by unique proteins in chloroplasts"Mol. Cell. Biol.. 22. 6726-6734 (2002)
[Publications] Hasegawa, K.: "Organization and transcription of the gene family encoding chlorophyll a/b-binding proteins in Nicotiana sylvestris"Gene. 289. 161-168 (2002)
[Publications] Mathieu, O.: "5S rRNA genes expression is not inhibited by DNA methylation in Arabidopsis"Plant Journal. 29. 313-323 (2002)
[Publications] Hasegawa, K.: "In vitro analysis of transcription initiation and termination from the Lhcbl gene family in Nicotiana sylvestris"Plant Journal. 33. 1063-1072 (2003)
[Publications] Sasaki, T.: "Identification of RNA editing sites in chloroplasts transcripts from the maternal and paternal progenitors of tobacco (Nicotiana tabacum)"Mol. Biol. Evol.. (未定). (2003)
[Publications] Plader, W.: "The Shine-Dalgarno-like sequence is a negative regulatory element for translation of tobacco chloroplast rps2 mRNA"Plant Journal. (未定). (2003)
[Publications] 杉浦昌弘: "生体の科学第53巻(2号)「RNAエディティングに関与するタンパク-クロロプラストの例」"医学書院. 124-130 (2002)

2002 Fiscal Year Annual Research Report

葉緑体のRNAプロセス・翻訳系に関与するRNA結合性蛋白質の研究

Principal Investigator

杉浦 昌弘 名古屋市立大学, 大学院・システム自然科学研究科, 教授 (80027044)

Research Products

[Publications] Miyamoto, T.: "Recognition of RNA editing sites is directed by unique proteins in chloroplasts"Mol. Cell. Biol.. 22. 6726-6734 (2002)

[Publications] Hasegawa, K.: "Organization and transcription of the gene family encoding chlorophyll a/b-binding proteins in Nicotiana sylvestris"Gene. 289. 161-168 (2002)

[Publications] Mathieu, O.: "5S rRNA genes expression is not inhibited by DNA methylation in Arabidopsis"Plant Journal. 29. 313-323 (2002)

[Publications] Hasegawa, K.: "In vitro analysis of transcription initiation and termination from the Lhcbl gene family in Nicotiana sylvestris"Plant Journal. 33. 1063-1072 (2003)

[Publications] Sasaki, T.: "Identification of RNA editing sites in chloroplasts transcripts from the maternal and paternal progenitors of tobacco (Nicotiana tabacum)"Mol. Biol. Evol.. (未定). (2003)

[Publications] Plader, W.: "The Shine-Dalgarno-like sequence is a negative regulatory element for translation of tobacco chloroplast rps2 mRNA"Plant Journal. (未定). (2003)

[Publications] 杉浦昌弘: "生体の科学 第53巻(2号)「RNAエディティングに関与するタンパク-クロロプラストの例」"医学書院. 124-130 (2002)

杉浦昌弘名古屋市立大学, 大学院・システム自然科学研究科, 教授 (80027044)

[Publications] 杉浦昌弘: "生体の科学第53巻(2号)「RNAエディティングに関与するタンパク-クロロプラストの例」"医学書院. 124-130 (2002)