抗生物質代替となるサルモネラ菌に特異なポリマー型抗体の開発

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12460119
• Research Institution: Utsunomiya University
• Principal Investigator: 菅野 長右エ門 宇都宮大学, 農学部, 教授 (30011969)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 小西 良子 国立感染症研究所, 食品衛生微生物部, 室長 (10195761) ; 下田 美智子 宇都宮大学, 農学部, 助手 (80240688) ; 東 徳洋 宇都宮大学, 農学部, 助教授 (30151062) ; 天野 冨美夫 国立感染症研究所, 細胞化学部, 主任研究員 (90142132)

Research Abstract

12年度に作成したSalmonella enteritidis(SE)に対するポリマー抗体のうち、3つの抗SE-IgAモノクローナル抗体を培養上清より大量に精製し、それらの感染防御機能を調べた。回収した培養上清を分画分子量約10万の遠心型限外濾過膜に供し、各抗SE-IgAモノクローナル抗体画分を約2mg/mlの濃度に濃縮した。抗体濃度はELISA法により測定した。精製した抗SE-IgA抗体を用いて特異性を調べたところ、2つの抗体がSE由来LPSと濃度依存的に結合性を示した。またいずれもSE以外ではSalmonella abortis equi由来のLPSには結合したが、Salmonella typhimuriumをはじめとする他のSalmonella由来LPSには全く結合しなかった。次に抗体の静菌効果を調べるために、SEを各抗体を含む培地に懸濁して室温で1〜24時間静置した後、寒天培地上で一昼夜培養し、コロニー形成率を測定した。その結果、抗体と4〜24時間混合したSEのコロニー形成率は、抗体無添加の場合に比べ約2〜10倍低下していた。また、各抗体についてSEの腸管細胞に対する結合阻害活性を調べる目的でヒト腸管細胞Caco-2を約13日間培養し、種々の濃度の抗体を含む培地にSEを懸濁してCaco-2とともにインキュベートした。洗浄後細胞を可溶化して寒天培地にまき、Caco-2に結合したSEのコロニー数を測定した。その結果、約10〜20μg/mlの抗SE-IgA抗体存在下において約30〜50%のSE結合阻害活性が得られた。以上の結果より、12年度に作成した抗SE-IgA抗体は優れた感染防御機能を有することが示された。