2002 Fiscal Year Annual Research Report
食細胞内での細菌の生き残り戦略:ロドコッカス・エクイ病原性プラスミドの機構解析
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12460140
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| Research Institution | Kitasato University |
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Principal Investigator |
高井 伸二 北里大学, 獣医畜産学部, 助教授 (80137900)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
斑目 広郎 麻布大学, 獣医学部, 助教授 (20173768)
関崎 勉 動物衛生研究所, 病原機能研究室, 室長
角田 勤 北里大学, 獣医畜産学部, 助手 (80317057)
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| Keywords | ロドコッカス・エクイ / 病原性プラスミド / 塩基配列 / 病原性 / マクロファージ / 細胞内寄生菌 / 馬 / 毒力 |
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| Research Abstract |
本研究の目的は病原性プラスミド上に存在する遺伝子の機能解析を行い、病原性プラスミドが生み出す食菌抵抗性・殺菌回避メカニズムを分子遺伝学的に明らかにしようとするものである。平成13年度には、ショットガンクローニング法を用いAIDS患者由来中等度毒力株の79kb病原性プラスミド(pREA3)の79,288bp全塩基配列を決定した。中等度毒力株よりもマウス毒力で10倍、子馬では百倍以上の感染最小濃度が異なる強毒株のプラスミドのORF64個と中等度毒力株の71個のORFを比較検討したところ、中等度毒力株に特有な5種類の新たな毒力関連抗原(Virulence associatd protein antigen (Vap) family)がpathogenicity islandを形成していることを明らかにした。今年度は、さらに遺伝子解析を行ったところ、強毒株と中等度毒力株のPI領域の相同性よりも、それ以外の領域の相同性が90-99%と極めて類似していることが明らかとなった。現在、強毒株の病原性プラスミドは10種類、中等度毒力株の病原性プラスミドは18種類存在することが制限酵素切断像(RFLP)解析から明らかとなっている。大きさも強毒株、中等度毒株で80-90kb、79-100kbと異なり、これらがどの領域における変化によって生じたかを比較することは、プラスミド上の領域の重要性を明らかに出来るものと考え、PCRとサザンハイブリダイゼーションによる検索を行った。その結果、pathogenicity islandを挟む領域が強毒株の多様性を生む遺伝子の挿入部位のホットスポットであることが明らかとなった。現在、あらたに挿入された(或いは逆に喪失した)塩基配列とその部位にどのようなORFが存在するかを検討している。
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[Publications] Takai, S., et al.: "Identification of virulence-associated antigens and plasmids in Rhodococcus equi from AIDS patients and prevalence of virulent R. equi in soil collected from domestic animal farms in Chiang Mai"Am. J. Trop. Med. Hyg. 66(1). 52-55 (2002)
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[Publications] Cuteri V, Takai S, et al.: "Detection of antibodies against Rhodococcus equi in Alpaca (Lama pacos) in Italy"Eur. J. Epidemiol. 17(11). 1043-1045 (2002)
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[Publications] Yuyama, T., et al.: "Molecular epidemiology of virulent Rhodococcus epui in thoroughbred horses in Kagoshima"J. Vet. Med. Sci.. 64(8). 715-718 (2002)
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[Publications] Martens RJ, et al.: "Evaluation of 5 serologic assays to detect Rhodococcus equi pneumonia in foals"J. Am. Vet. Med. Assoc. 221(6). 825-833 (2002)
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[Publications] Makrai L, Takai S, et al.: "Characterization of virulence plasmid types in Rhodococcus equi isolates from foals, pigs, humans and soil in Hungary."Vet. Microbiol. 88(4). 377-384 (2002)
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[Publications] Takai, S., et al.: "Isotype-specific antibody responses to Rhodococcus equi in foals on a horse-breeding farm with a persistent incidence of R. equi infection"J. Equine Sci.. 13(2). 63-70 (2002)
