蛍光プローブを用いた未知タンパク質のトポロジカルマッピング

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12460150
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 福井 希一 大阪大学, 大学院・工学研究科, 教授 (00311770)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 藤原 伸介 大阪大学, 大学院・工学研究科, 助手 (90263219) ; 高木 昌宏 大阪大学, 大学院・工学研究科, 助教授 (00183434)
• Keywords: GFP融合cDNAライブラリー / デコンボリューション法 / アラビドプシス / トポロジカルマッピング / 3次元可視化法 / ポストゲノム解析

Research Abstract

本年度はGFP融合ゲノムライブラリーの作成を課題とした。対象として選んだものはアラビドプシスのcDNAライブラリーである。これを用いてライブラリー内のcDNAとGFP遺伝子を無作為に融合し,GFP融合cDNAライブラリーを構築した。これらをさらにアラビドプシスを形質転換する為のベクターに組換え,これらの組換えベクターをバルクで用いてアラビドプシスの形質転換をアグロバクテリウム法を用いて行なった。また同時に細胞内におけるGFP融合タンパク質の局在を詳細に明らかにする為,3次元可視化法の最適化を行った。用いたシステムは従来の共焦点法の他にデコンボリューション法である。種々の環境要因や,レーザー強度,観察方法等を検討し,植物細胞内におけるタンパク質の局在を明らかにするための最適な条件を確立した。GFP融合cDNAライブラリーを用いた形質転換および本研究により確立した3次元可視化法を組み合わせる事により,形質転換した再分化アラビドプシス個体において細胞内に数箇所局在して存在するタンパク質の存在を確認した。この個体に導入したcDNAの塩基配列を部分的に決定し,かずさDNA研究所が公開しているデータベースを用いて相同性の検索を行なった。その結果,ヒットするものが見出された。現在,いまだ読めていないGFP遺伝子との融合部分における塩基配列を決定し,完全な塩基配列を用いた相同性検索を行なう事を試みている。

Research Products

• [Publications] Mikako Ito and Kiichi Fukui et.al.: "Quantitative Chromosome Map of Arabidopsis thaliana L.by Imaging Methods"Cytologia. 65. 325-331 (2000)
• [Publications] Mikako Ito and Kiichi Fukui et.al.: "Genome and Chromosome Dimensions of Lotus japonicus"J.Plant Res.. 113. 435-442 (2000)