2000 Fiscal Year Annual Research Report
遺伝子欠損マウスにおけるアンチザイムの生物学的意義の解析
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12470031
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| Research Institution | Jikei University School of Medicine |
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Principal Investigator |
松藤 千弥 東京慈恵会医科大学, 医学部, 教授 (50192753)
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| Keywords | ノックアウトマウス / アンチザイム / オルニチン脱炭酸酵素 / ポリアミン / 胎生部分致死 / 培養胎児線維芽細胞 / ジフルオロメチルオルニチン / アンチザイム2 |
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| Research Abstract |
1.AZ1欠損マウスの周産期部分致死性の解析:戻し交配によってノックアウトマウスの遺伝的背景をC57BL/6(B6)または129系に均一化してもAZ1欠損ホモ接合体の部分致死性を認めたが、致死率と死亡の時期は遺伝的背景によって若干異なっていた。胎生13.5日以降の子宮内ホモ接合体には、皮膚の蒼白、皮下浮腫、発育遅延などの異常が20〜80%の頻度でみられ、体幹部の点状出血を伴うこともあり、AZ1が発生過程で何らかの特異的な役割を演じていることが示唆された。AZ1欠損マウス胎仔の組織・羊水内ポリアミンは高値であり、妊娠後期の母体にODCの特異的阻害剤α-ジフルオロメチルオルニチンを投与すると周産期死亡が抑制されたことから、死亡原因はポリアミンの増加によることが示唆された。現在第2のAZ1欠損マウス系統において表現型の確認を行っている。
2.AZ1欠損培養細胞における検討:C57BL/6に戻し交配したAZ1欠損マウス系統より初代培養胎児線維芽細胞を調製した。AZ1欠損の有無で細胞の形態、増殖速度、アポトーシス細胞の比率には有意差がなかった。SV40LargeT遺伝子の導入によって不死化したAZ1欠損細胞ではODC活性の増加は小さいが、ポリアミン添加時のODC抑制が遅延した。またAZ1欠損細胞にもアンチザイム活性が検出され、AZ2などAZ1以外のアンチザイム分子種が制御機能を代償していると考えられる。
3.AZファミリー蛋白質の分子機能解析:哺乳動物細胞へのAZ2の遺伝子導入と、試験管内の実験により、AZ2にもポリアミン依存性のODCの抑制活性があることが明らかとなった。
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[Publications] Ivanov,I.P.: "Conservation of polyamine regulation by translational frameshifting from yeast to mammals"EMBO J.. 19・8. 1907-1917 (2000)
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[Publications] Murakami,Y.: "Degradation of ornithine decarboxylase by the 26S proteasome"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 267・1. 1-6 (2000)
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[Publications] Kim,L.K.: "Methylation of the ribosyl moiety at position 34 of selenocysteine tRNA ^<[Ser]Sec> is governed by both primary and tertiary structure"RNA. 6・9. 1306-1315 (2000)
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[Publications] Saito,T.: "Two zebrafish antizymes with different expression and activities"Biochem.J.. 345・1. 99-106 (2000)
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[Publications] 村上安子: "オルニチン脱炭酸酵素とアンチザイム"実験医学. 19・2. 173-179 (2000)
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[Publications] 村上安子: "迅速なポリアミン制御を可能にするオルニチン脱炭酸酵素の分解系."化学と生物. 39・3. 171-176 (2001)
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[Publications] 松藤千弥: "RNA研究の最前線"シュプリンガー・フェアラーク東京. 238 (2000)
