2000 Fiscal Year Annual Research Report
情報伝達因子NF-kB変異コンジェニック・ラットの作製とその分子病理学的解析
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12470051
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
守内 哲也 北海道大学, 遺伝子病制御研究所, 教授 (20174394)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
浜田 淳一 北海道大学, 遺伝子病制御研究所, 助教授 (50192703)
多田 光宏 北海道大学, 遺伝子病制御研究所, 助教授 (10241316)
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| Keywords | LEC / NF-kB / p53 / 肝臓 / GPx1 |
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| Research Abstract |
LECラットと正常対照LEAラット肝の性質を反映していると考えられる93C13細胞(LECラット肝由来)と93A16細胞(LEAラット肝由来)を用いて、グルタチオンペルオキシダーゼ(GPx1)プロモーター活性の測定を行った。これらの細胞に抗癌剤エトポシドでp53を誘導してp21(WAF1/Clip1)遺伝子のプロモーターを持つPG13 pyLucでルシフェラーゼ・アッセイを行った実験では、両細胞株ともp21の転写活性が上昇した。これに対し、GPx1プロモーターはエトポシドにより93A16細胞は活性上昇を示したが、93C13細胞は無反応であった。同様に、NF-κB結合配列を持つエンハンサー活性用ベクターでルシフェラーゼアッセイを行うと、93A16細胞ではTNF-αによりルシフェラーゼ活性の上昇が認められたが、93C13細胞ではほとんどルシフェラーゼ活性は上昇しなかった。これらの結果から、LEC由来の93C13細胞ではGPx1プロモーターがp53やNF-κBに反応するための因子が不足していることが予測された。そこでGPx1プロモーターの各種deletion mutantを作製してルシフェラーゼアッセイを行うと、ルシフェラーゼ活性はGP1配列を欠損させても低下しなかった。また93C13細胞における転写活性は常に93A16細胞における転写活性より低く、いずれのdeletion mutantでもその比は同じであった。以上より、LECラット由来肝細胞においては、GPx1の発現低下は特異的転写因子の差ではなく、基本転写因子を含む転写複合体に異常があるためp53やNF-κBのエンハンサー効果が発揮されないことに因ると考えられた。
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[Publications] Hamada, J.: "Increased Oxidative DNA Damage in Mammary Tumor Cells by Continuous Epidermal Growth Factor Stimulation."J Natl Cancer Inst.. 93. 214-219 (2001)
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[Publications] Ba, Y.: "Transcriptional slippage of p53 gene enhanced by cellular damage in rat liver : monitoring the slippage by a yeast functional assay"Mutat Res.. 447. 209-220 (2000)
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[Publications] Takeuchi, S.: "Isolation of Differentiated Squamous and Undifferentiated Spindle Carcinoma Cell Lines with Differing Metastatic Potential from a 4-NQO-induced Carcinoma"Jpn J Cancer Res.. 91. 1211-1221 (2000)
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[Publications] Zhang, CL.: "Detection of PTEN nonsense mutation and psiPTEN expression in high-grade astrocytic tumors by a yeast -based stop codon assay"Oncogene. 19. 4346-4353 (2000)
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[Publications] Furuuchi, K.: "Somatic mutations of the APC gene in primary breast cancers"Am.J.Pathol.. 156. 1997-2005 (2000)
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[Publications] Takahashi, M.: "Distinct prognostic values of p53 mutations and loss of estrogen receptor and their cumulative effect in primary breast cancers"Int J Cancer. 89. 92-99 (2000)
