心血管系における新しいアンカータンパク質MYPTファミリーの機能の解析-発生工学を用いた動物個体レベルでの検討-

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12470152
• Research Institution: Mie University
• Principal Investigator: 中野 赳 三重大学, 医学部, 教授 (60111879)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 鈴木 昇 三重大学, 医学部, 助教授 (00202135) ; 伊藤 正明 三重大学, 医学部・附属病院, 講師 (00223181)
• Keywords: ミオシンホスファターゼ / MYPT1 / MYPT2 / Rhoキナーゼ / トランスジェニックマウス / ノックアウトマウス

Research Abstract

(1)MYPT1ノックアウトマウス(MYPT1-KO)の作製
昨年度に作製されたMYPT1-KOのヘテロマウスを交配させホモマウスを作製することを試みたが、誕生するマウスはヘテロと野生型がそれぞれ35匹、94匹であるのに対しホモマウスは誕生せず、MYPT1のノックアウトは胎生致死であることが明らかになった。Preliminaryな結果であるが、胎児のPCR解析で胎生8.5日前後までホモマウスの存在が判明し、この時期以降に致死になることが疑われる。今後MYPT1ノックアウトによる胎生致死の原因を解明するとともに、Cre-loxPシステムを用いてノックアウトの誘導がtamoxifenなどの薬剤投与によって誘導できる系を用いてMYPT1-KOマウスの作製を続けていく計画である。
(2)MYPT1ならびにMYPT2トランスジェニックマクスの作製
昨年度の研究で得られたMYPT1トランスジェニックマクス(MYPT1-TG)の組織におけるMYPT1発現状況をウェスタンブロットにて解析したところ、大動脈、消化管や膀胱などの平滑筋組織でMYPT1の過剰発現は誘導されていないことが判明した。さらにもう1系統MYPT1-TGマウスが得られてきており、蛋白レベルでの発現誘導を確認後、フェノタイプの解析を行う予定である。MYPT2のトランスジェニックマクスに関しては、PCRにてMYPT2の遺伝子がインテグレージョンされた2系統が得られたため、今後この系統の解析を進める計画である。

Research Products

• [Publications] Hirofumi Machida: "Molecular cloning and analysis of 5:flanking region of human MYPT1 gene"Biochim.Biophys.Acta.. 1517. 424-429 (2001)
• [Publications] Kouji Yamawaki: "Identification of human CPI-17,an inhibitory phosphoprotein for myosin pnospnatase"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 285. 1040-1045 (2001)