2000 Fiscal Year Annual Research Report
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12470185
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
鈴木 紀夫 東京大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (10010050)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
平野 和也 東京薬科大学, 薬学部, 講師 (80251221)
榎本 敦 東京大学, 大学院・医学系研究科, 助手 (20323602)
松本 義久 東京大学, 大学院・医学系研究科, 助手 (20302672)
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| Keywords | 放射線誘発アポトーシス / SAPK / JNK / セラミド / MOLT-4 / p41特異抗体 |
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| Research Abstract |
放射線高感受性のMOLT-4細胞の照射後応答のシグナル伝達経路に関与する上流分子郡と新規誘導タンパクp41がどのように放射線誘発細胞死に関与しているか解明することを目的とした。
X線で照射後、急速なviabilityの低下を示し、Caspase/CADの活性化を伴い細胞死を呈すが典型的なDNA ladderを示さない。p53はwild typeとされ、p21WAF1とともに照射後増加するが、Baxは増加しなかった。この急速なviabilityの低下が酸性スフィンゴミエリナーゼ阻害剤(D609)によって有意に抑制された(p53,WAF-1誘導は阻害せず)。MOLT-4とFM3A細胞からRadiation-hybrid法により樹立したX線抵抗性雑種Rh-1a細胞ではBcl-2やp53タンパクの発現量に親株との違いはなく、X線、セラミド誘発アポトーシスの間で交差抵抗性を示した。一方、MOLT/mbcl-2細胞は、X線、セラミド誘発アポトーシスに対して強い抵抗性を示した。
MOLT-4細胞ではX線照射やC2-ceramide処理後、SAPK/JNKの持続的な強い活性化が見られたが、Bcl-2過剰や酸性スフィンゴミエリナーゼ阻害剤で前処理したMOLT-4細胞ではX線照射後のSAPK/JNK活性化が抑制されており、Rh-1a細胞では、照射後、一過性の弱いSAPK/JNK活性化を呈した。このことからMOLT4細胞死の誘導には一過性ではなく持続的で高いSAPK/JNK活性化が必要でp53非依存性セラミド経路が重要であると考えられた。
p42特異抗体とp41特異抗体(p42の切断後に露出するようになるグリシン19のアミノ基と、その後続アミノ酸配列を特異的に認識する切断部位特異的抗体)を作製した。今後、当初の目的に沿って解析を進める予定である。
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Research Products
(8 results)
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[Publications] Matsumoto,Y.: "Cleavage and phosphorylation of XRCC4 protein induced by X-irradiation."FEBS Lett.. 478. 67-71 (2000)
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[Publications] Tomita,M.: "Sensitization by wortmannin of heat- or X-ray induced cell death in cultured chinese hamster V79 cells."J.Radiat.Res.. 41. 93-102 (2000)
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[Publications] Enomoto,A.: "Involvement of SAPK/JNk pathway in X-ray-induced rapid cell death of human T-cell leukemia cell line MOLT-4."Cancer Lett.. 155. 137-144 (2000)
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[Publications] Morita,A.: "p41as a possible marker for cell death is generated by caspase cleavage of p42/SETβin irradiated MOLT-4 cells."Biochemical and Biophysical Reaearch Communications. 278. 627-632 (2000)
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[Publications] Kang,Y.: "Increased expression after X-irradiation of MUC1 in cultured human colon carcinoma HT-29 cells."Jpn.J.Cancer Res.. 91. 324-330 (2000)
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[Publications] H.-J.Zhao,: "DNA-dependent protein kinase activity correlates with Ku70 expression and radiation sensitivity in esophageal cancer cell lines."Clin.Cancer Res.. 6. 1073-1078 (2000)
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[Publications] Sakata,K.: "Expression of Genes involved in Repair of DNA Double-strand Breaks in Normal and Tumor Tissues."Int.J.Radiat.Oncol.Biol.Phys.. 49. 161-167 (2001)
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[Publications] Enomoto,A.: "Involvement of c-Jun NH_2-terminal kinase-1 in heat-induced apoptotic cell death of human monoblastic leukemia U937 cells."Int.J.Radiat.Biology. (in press). (2001)
