2002 Fiscal Year Annual Research Report
シグナル伝達分子異常による血液疾患分子モデルの確立
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12470204
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| Research Institution | Jichi Medical School |
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Principal Investigator |
小松 則夫 自治医科大学, 医学部, 助教授 (50186798)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
外島 正樹 自治医科大学, 医学部, 助手 (00306151)
内田 美栄 自治医科大学, 医学部, 助手 (80316520)
森 政樹 自治医科大学, 医学部, 助手 (00337346)
柏井 良文 自治医科大学, 医学部, 助手 (10271222)
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| Keywords | FKHRL1 / トランスジェニックマウス / DNAマイクロアレイ / UT-7 / EPO / タモキシフェン / DAF-16 |
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| Research Abstract |
【研究目的】
Forkhead転写因子ファミリーはForkhead domainと呼ばれるDNA結合ドメインを有し、非常に広範な種で保存されており、胚形成、分化、腫瘍発生など生物にとって量要な機能を担っている。特に線虫に存在するDAF-16は寿命に関わる分子として注目されている。DAF-16のヒトホモログAFX、FKHR、FKHRL1は何れもヒトの腫瘍で起こった染色体切断部位で同定された遺伝子で、FKHRL1は2次性自血病で認められたt(6;11)(q21;q23)転座におけるMLL遺伝子の新しい融合相手として発見された。FKHRL1のin vivo造血における機能を明らかにするために、FKHRL1TMトランスジェニックマウスの解析及びFKHRL1の標的分子の同定を試みた。
【方法・結果】
(1)FKHRL1TMトランスジェニック(Tg)マウスの解析:赤芽球・巨核球系に特異的に発現する転写因子GATA-1の発現調節領域の下流にFKHRLITM連結させたコンストラクトを用いてTgマウスを作製し解析した。その結果、血小板数ならびにヘモグロピン値および巨核球、赤芽球系前駆細胞は正常範囲であった。そこで抗癌剤による骨髄抑制後の赤血球や巨核球・血小板回復への影響を検討したが、コントロールに比して有意な変化はなかった。したがって赤芽球や巨核球前駆細胞の増幅にはFKHRL1は寄与していないことが明らかになった。
(2)DNAマイクロアレイ法を用いたFKHRL1のターゲット遺伝子の同定:UT-7/EPO細胞株を用いてタモキシフェンによるFKHRL1発現誘導システムを操作し、DNAチツブを用いて、タモキシフェン添加後の遺伝子発現パターンを添加前と比較検射し、両者で発現の異なる遺伝子を検出した。その結果、TRAIL、cyclin G2、PA26などがFKHRL1の檬的遺伝子である可能性が示唆された。
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[Publications] Komatsu, N: "A member of Forkhead transcription factor FKHRL1 is a downstream effector of ST1571 induced cell cycle arrest in BCR-ABL expressing cells"J Biol Chem. 278. 6411-6419 (2003)
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[Publications] Mori, M: "Activation of extracellular signal-regulated kinaze ERK1 and ERK2 induces bcl-xl up-regulation via inhibition of caspase activities in erythropietin signaling"J Cell Physiol. (in press).
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[Publications] Kirito, K: "TPO regulates Bcl-xL gene expression through Stat5 and phosphatidylinositol-3-kinase activation pathways"J Biol Chem. 277. 8329-8337 (2002)
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[Publications] Kirito, K: "A Functional role of Stat3 in in vivo megakaryopoiesis"Blood. 99. 3220-3227 (2002)
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[Publications] Kirito, K: "Identification of the human erythropoietin receptor region required for Stat1 and Stat3 activation"Blood. 99. 102-110 (2002)
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[Publications] Shimizu, S: "EVl1 is expressed in megakaryocyte cell lineage and enforced expression of EVl1 in UT7/GM cells induces megakaryocyte differentiation"Biochem Biophys Res Commun. 292. 609-616 (2002)
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[Publications] Otsuki, T: "Phosphorylation of Fanconi anemia protein, FANCA, is regulated by Akt kinase"Biochem Biophys Res Commun. 291. 628-634 (2002)
