生殖腺刺激ホルモンFSHβ鎖遺伝子に結合するホメオティック因子の解析

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12470217
• Research Institution: Meiji University
• Principal Investigator: 加藤 幸雄 明治大学, 農学部, 教授 (30114177)
• Keywords: 下垂体 / 生殖腺刺激ホルモン / 生殖腺刺激ホルモン / 性腺刺激ホルモン / 遺伝子 / 生殖

Research Abstract

平成12年度は下記のような実験を進めた
1)これまでに見いだしたFSHβ遺伝子上流約800塩基領域にある107塩基対からなるFd2と名付けたDNA断片をレポーター遺伝子をもつ酵母の発現ベクターに連結したコンストラクトを構築した。
2)この遺伝子を酵母の染色体上に組み込んだ変異酵母をクローン化した。
3)ブタ下垂体cDNAライブラリーを転写因子GAL4の活性化部位に融合させたcDNAライブラリーを作成した。
4)ライブラリーを変異体酵母に導入して、cDNAの発現産物がFd2に結合能を示して得られるレポーター遺伝子の発現を指標として、DNA結合因子のクローンの選択を行った。
5)繰り返し行ったクローニングにより、現在まで4種の転写因子クローンを得た。
6)上記因子クローンの塩基配列を解析し、多くの転写因子に共通する特徴的なDNA結合ドメインを確認した。
7)クローン化した因子を用いて、酵母への再導入、組換え体タンパク質を用いて、確かにFd2に特異的に結合することを確認した。
8)全長クローンの作成、FSHβ遺伝子発現に係わる機能の解析を開始した。
9)組換え体転写因子を精製し、抗体作成に着手した。

Research Products

• [Publications] Chen,L.: "Cytological characterization of a pituitary folliclo-stellate-like cell line. Tpit/F1, with special reference to adenosine triphosphate-mediated neuronal nitric oxide synthase expression and nitric oxide secretion"Endocrinology. 141. 3603-3610 (2000)
• [Publications] Nishida,N.: "Critical role of nitric oxide in expression of porcine LH receptor at transcription and post-transcription levels"Experimental and Clinical Endocrinology and Diabetes. 108. 424-429 (2000)
• [Publications] Nishida,N.: "Transcription facgtor genes, c-fos and c-jun, in developing porcine granulosa cells in vitro"Journa of Reproduction and Development. 46. 167-175 (2000)
• [Publications] Hattori M.: "FSH suppression of nitric oxide synthesis in porcine oocytes"Journa of Molecular Endocrinology. 24. 65-73 (2000)
• [Publications] 加藤幸雄: "成長ホルモン遺伝子とプロラクチン遺伝子の発現スイッチングのリアルタイム測定系の開発"成科学協会研究年報. 23. 167-172 (2000)
• [Publications] Takesue,K.: "Stimulation of nitric oxide synthesis in porcine granulosa cells by phorbol ester"Journa of Reproduction and Development. 47. 1-6 (2001)