自己軟骨細胞を利用した新たなバイオマトリックス膵ランゲルハンス島移植の研究

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12470235
• Research Institution: Chiba University
• Principal Investigator: 剣持 敬 千葉大学, 医学部・附属病院, 講師 (50215133)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 西郷 健一 千葉大学, 医学部・附属病院, 助手 (60323424) ; 和田 佑一 千葉大学, 医学部・附属病院, 助手 (10282485) ; 浅野 武秀 千葉大学, 大学院・医学研究院, 講師 (80143311) ; 圷 尚武 千葉大学, 医学部・附属病院, 医員 ; 丸山 通広 千葉大学, 医学部・附属病院, 医員
• Keywords: 膵島分離 / 軟骨細胞 / 膵島移植 / 遺伝子導入 / 凍結保存

Research Abstract

<1.軟骨細胞,膵島の混合培養:>___-
ハムスターの骨端軟骨を採取、コラゲナーゼ処理にて軟骨細胞を分離・培養し、In vitroでの増殖,重層構造、繊維芽軟骨形成を確認した。次に、DAラット膵よりコラゲナーゼ消化法にて分離した膵島とLewisラットの膝関節より分離した軟骨細胞を混合培養した。膵島の周囲に軟骨細胞の増殖がみられ、両者はviabilityを保持したまま培養可能であった。膵島形態は保たれ,インスリン分泌も培養後3週間良好に保たれた。
<2.膵島への効率的遺伝子導入法の検討:>___-
non-viralの遺伝子導入法として#1.Gene gun法(Helios^<TM> Gene Gun(BIO-RAD))、#2.Lipofection法(LIPOFECTAMINE2000(LIFE TECHNOLOGIES))、#3.Electroporation法(Gene-Pulser II(BIO-RAD))の3種類の方法を用い、膵島への遺伝子導入効果につき検討した。犬膵島を用い、plasmid pCMS-EGFP(CLONTECH)を導入した.導入効率はLipofection法で95%と他の方法に比較して優れていた。また導入膵島の機能も非導入膵島と比較してほぼ同等であった。
<3.独自の膵島凍結保存法の開発:>___-
独自のバッグ大量凍結保存法を考案した。Beagle犬膵島を骨髄移植に臨床応用されているCP-1液(極東製薬工業)を用いて、バッグ(Cryogenic storage container,CPL99,CharterMed Inc.)に封入し、Program freezer(Cryomed Model 1010)にて緩速凍結した。解凍後の膵島は良好な形態を示し、回復率も80%以上と良好であり、充分なインスリン分泌能がみられた(Static incubation:2.3)。

Research Products

• [Publications] Kenmochi T et al.: "Purification of pancreatic islets using hydroxyethyl starch(HES)-Collins solution"Transplantation Proceedings. 33. 670-671 (2001)
• [Publications] Jingu K et al.: "Evaluation of non-heart-beafing donors as a potential source for puntrentic islet tramsplimtation"Transplantation Proceedings. 33. 1492-1493 (2001)
• [Publications] 坂本 薫 他: "ミニブタを用いたランゲルハンス氏島移植"今日の移植. 14(3). 243-248 (2001)
• [Publications] 剣持 敬: "組織移植"日本医学館. 110 (2001)