2002 Fiscal Year Annual Research Report
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12470239
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
宮川 周士 大阪大学, 医学系研究科, 助教授 (90273648)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
村上 博 日本動物工学研究所, 研究員
岡部 勝 大阪大学, 遺伝情報実験施設, 教授 (30089875)
白倉 良太 大阪大学, 医学系研究科, 教授 (00116047)
福田 大輔 ニプロ株式会社, 研究員
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| Keywords | DAF / C1-INH / 補体制御因子 / ブタ血管内皮 / CHO細胞 / HSV-gC1 |
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| Research Abstract |
DAF及びC1 esterase inhibitor (C1-INH)の様々なformの検討
Short consensus repeats (SCR) 1を欠失させたDAF(d-SCR1-DAF)及びSCR2-3-4を2つ連結させたDAF(double-DAF)、また、C1-INHは6種類の様々な領域を欠失させたformを構築した。これらをCHO細胞に遺伝子導入し、LDH assay及び補体沈着量の測定により補体抑制機能を検討した。
結果は、1.d-SCR1-DAF及びdouble-DAFは正常にCHO細胞上に発現した。2.C1-INHは1-99アミノ酸を欠失させたform(d-1-99AA-C1-INH)のみがCHO細胞上に発現した。3.double-DAFはd-SCR1-DAFと比べ効果的に補体の活性化を抑制した。4.double-DAFはC3の沈着を抑制し、d-1-99AA-C1-INHはC4の沈着を抑制した。
double-DAFはさらなる補体の活性化の抑制に、また、d-1-99AA-C1-INHはC4の沈着の抑制に有効であった。
HSV-1による補体制御作用の検討
HSV-gC1をCHO cellおよびブタ血管内皮細胞(SEC)に遺伝子導入し,安定発現株を得た。
HSV-gC1は予想されたサイズでSECおよびCHO cellの細胞表面上に発現することが示された。LDH assayの結果では、SECに発現させた場合HSV-gC1の細胞傷害抑制効果は20-50%で、80-95%のDAFに比べて低いが有意に補体抑制効果を示した。CHO cellでの結果はSECの場合と若干異なり、いくつかの血清でむしろ補体反応を活性化する傾向が見られた。これらのヒト血清をウェスタンブロットにて解析したところHSV-gC1に対する抗体反応が陽性であることが示された。
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[Publications] Matsunami K, Miyagawa S, Fukuta D, Shirakura R: "Regulation of Complement-Mediated Swine Eddothelial Cell Lysis by Herpes Simplex Virsus Glyconrotein gC1"J.Biochem. 131. 745-749 (2002)
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[Publications] Fukuta D, Miyagawa S, Yamada M, Matsunami K, Shirakura R, et al.: "Effect of Various forms of C1 esterase inhibitor (C1-INH) and DAF on complement mediated xenogeneic cell lysis"Xenotransplantation. (In press).
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[Publications] Matsunami K, Miyagawa S, Fukuta D, Shirakura R: "Functional analysis of HSV-gC1 on swine endothelial cell"Transplantation Proc.. (In press).
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[Publications] Fukuta D, Miyagawa S, Yamada M, Matsunami K, Shirakura R, et al.: "Effect of various forms DAS(CD55) and C1 esterase inhibitor (C1-INH)"Transplantation Proc.. (In press).
