Ets related gene(erg)による軟骨組織形成制御機構の解析

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12470384
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 岩本 容泰 大阪大学, 大学院・歯学研究科, 講師 (30223431)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 樋口 義信 中外製薬株式会社, 創薬研究所, 主査(研究職) ; 豊澤 悟 大阪大学, 大学院・歯学研究科, 講師 (30243249) ; 岩本 資己 大阪大学, 大学院・歯学研究科, 講師 (80203644)
• Keywords: 軟骨形成 / 成長軟骨 / 内軟骨性骨化 / 永久軟骨 / erg / 転写調節因子

Research Abstract

本研究の目的は、成長軟骨と関節軟骨組織にそれぞれドミナントに発現するEts related geneの作用および発現制御機構を解析して、異なる運命をたどる両軟骨組織の発生機構を解明することである。平成12年度は、c-ergおよびC-1-1の機能ドメインのマッピングを行なった。c-ergおよびC-1-1のDNA結合ドメイン(EDB:Ets DNA binding domain)の5'側あるいは3'側より種々の長さの領域を欠損させた変異体(deletion mutant)を作成した。そして、ergの標的遺伝子のひとつである、コラゲナーゼIのプロモーターをホタルルシフェレースをレポーターとするレポーターplasmidを作成して、様々なc-ergおよびC-1-1の変異体(deletion mutant)とともに軟骨細胞あるいは線維芽細胞に導入した。レポーター遺伝子の発現レベルを測定した結果、c-ergとC-1-1の転写活性発現にはEDBの3'側の領域が必須であった。c-ergとC-1-1のC端の20アミノ酸には3つのチロシン残基があり、この部位は、種を通じて保存されている。したがって、c-ergおよびC-1-1の転写促進活性発現に同部のリン酸化が関わる可能性がある。また、c-ergとC-1-1はEDBの5'側の81bp部分の有無が異なっているが、本レポーターアッセイ系では、両isoforms間では、明確な転写活性の差異を検出できなかった。そこで、軟骨組織内でのc-ergおよびC-1-1の標的遺伝子である可能性の高いテナスチンCのプロモーターを用いて、新たにレポーターplasmidを作成し、現在、同レポーターplasmidを用いて再度機能ドメインのマッピングを行なっている。また、マウスEts related geneのクローニングを開始した。これまで、3種類のisoformsを分離している。

Research Products

• [Publications] Enomoto,H. et al.: "Cbfal is a positive regulatory factor in chondrocyte maturation."J.Biol.Chem.. 275. 8695-8702 (2000)
• [Publications] Iwamoto,M.: "Transcription factor ERG variants and functional diversification of chondrocytes during limb long bone development."J.Cell Biol.. 150. 27-40 (2000)
• [Publications] Ueta,C. et al.: "Skeletal malformations caused by overexpression of Cbfa1 or its dominant negative form in chondrocytes."J.Cell Biol.. (In press).
• [Publications] Enomoto-Iwamoto,M. et al.: "Hedgehog proteins stimulate chondrogenic cell differentiation and cartilage formation"J.Bone Miner.Res.. 15. 1695-1688 (2000)
• [Publications] 岩本資己 ほか: "軟骨の発生と再生"実験医学. 18. 1325-1332 (2000)
• [Publications] 岩本資己 ほか: "新・分子骨代謝学と骨粗鬆症"メディカル・ビュー社(印刷中).