2003 Fiscal Year Annual Research Report
複製前複合体形成の試験管内再構成系の確立とその制御機構の解明
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12470499
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| Research Institution | OKAYAMA UNIVERSITY |
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Principal Investigator |
水島 徹 岡山大学, 薬学部, 助教授 (00264060)
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| Keywords | DNA複製 / ORC / Cdc6p / ATP / 活性調節 / ADP |
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| Research Abstract |
大腸菌の複製開始因子DnaAはATP、及びADPと結合し、それにより複製開始反応が制御されている。即ち、ATP結合型DnaAが活性型なのに対し、ADP結合型DnaAは不活性である。一方真核生物の複製開始因子ORC(Origin Recognition Complex)はATPと結合する二つのサブユニット(Orc1pとOrc5p)を持っている。しかしそれらがADPとも結合するのかは全く分かっていなかった。今年度我々はORCのADP結合に関し、フィルター結合アッセイ法を確立しその生化学的性質を解析した。その結果、Orc5pは、ATP同様(Orc5pとATPとのKd値は約10nM)、高い親和性でADPと結合すること(Orc5pとADPとのKd値は約10nM)を見出した。一方、Orc1pは、ATPとは異なり(Orc1pとADPとのKd値は約10nM)、ADPとは結合出来なかった。ORCに対するATP結合はorigin DNAによって促進されたのに対し、ADP結合はorigin DNAによって影響を受けなかった。さらに、ATP存在下、ORCはorigin DNAと特異的に結合するのに対し、ADP存在下では結合出来ないことが分かった。従ってADP結合型ORCは、複製開始因子として不活性であることが分かった。以上全ての結果は、DnaA同様、ORCの活性制御に関しても、ADP結合が重要な役割を果たしていることを示唆している。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Makise, M.: "Kinetics of ATP-binding to Origin Recognition Complex of Saccharomyces cerevisiae."J.Biol.Chem.. 278. 46440-46445 (2003)
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[Publications] Takahashi, N.: "Analysis on Origin Recognition Complex containing Orc5p with defective Walker A motif."J.Biol.Chem.. (in press).
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[Publications] Hoshino, T: "Prostaglandin E_2 protects gastric mucosal cells from apoptosis via EP_2 and EP_4 receptor activation."J.Biol.Chem.. 278. 12752-12758 (2003)
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[Publications] Mizushima, T.: "Protection of gastric mucosal cells from apoptosis and necrosis by induction of HSP and PGE_2"Jpn.J.Hyperthermic Oncol.. 19. 67-78 (2003)
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[Publications] Tsutsumi, S.: "Molecular mechanism of adaptive cytoprotection induced by ethanol in human gastric cells."Exp.Biol.Med.. 228. 1089-1095 (2003)
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[Publications] Sekiya, H.: "Functional cloning and characterization of a multidrug efflux pump, MexHI-OpmD, from a Pseudomonas aeruginosa mutant."Antimicrob.Agents Chemother.. 47. 2990-2992 (2003)
