Jab1によるCDKインヒビターp27の分解制御

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12480216
• Research Institution: Nara Institute of Science and Technology
• Principal Investigator: 加藤 順也 奈良先端科学技術大学院大学, バイオサイエンス研究科, 教授 (00273839)
• Keywords: 細胞周期 / 蛋白質分解 / CDKインヒビター / COP9シグナロソーム / 核外輸送

Research Abstract

CDKインヒビターp27は、in vitroあるいはin vivoにおいて細胞増殖の抑制に中心的役割を果たし,正常発生における器官形成やがんの抑制にも重要な働きをする。p27は多彩な制御を受けるが、細胞周期依存的・基質特異的タンパク質分解機構による制御が注目を集めている。本研究では、Jab1によるp27分解制御機構に関する研究を行った。その結果、以下の結果を得た。
(1)ドミナントネガティブJab1を増殖中のマウス繊維芽細胞株に導入すると、内在性p27の発現量が上昇し細胞周期の進行がG1期にて停止することを明らかにした。この際、DN-Jab1はc-Junと相互作用することはなく内在性p27と複合体を形成していた。また、DN-Jab1の発現は内在性COP9シグナロソーム複合体の存在量および形態に影響を与えることはなかった。
(2)Jab1を構成的に発現する細胞株が得られなかったため、Jab1の強制発現は細胞の増殖停止かあるいはアポトーシスを誘導すると考え、発現誘導可能な系の導入を試みた。メタロチオネインプロモーターの利用によっても発現誘導は達成できなかったため、より厳密に制御できるテトラサイクリンによる発現誘導系の導入を行っている。GFPをレポーターとした予備実験の結果、マウスの線維芽細胞で良好な結果を得たので、現在、Jab1に適応している。
(3)Jab1のゲノム構造を明らかにしターゲティングベクターを構築した。これを用いて、ES細胞の片方の遺伝子座の破壊に成功した。

Research Products

• [Publications] Sugiyama Y.: "Direct binding of the signal-transducing adaptor Grb2 facilitates downregulation of the cyclin-dependent-kinase inhibitor p27^<kipl>"J Biol Chem. 276. 12084-12090 (2001)
• [Publications] Sugihara T.: "Pex19p dampens the p19ARF-p53-p21WAF1 tumor suppressor pathway"J Biol Chem. 276. 18649-18652 (2001)
• [Publications] Tomoda K.: "The cytoplasmic shuttling and subsequent degradation of p27^<kipl> mediated by Jab1/CSN5 and the COP9 signalosome complex"J Biol Chem. 277. 2032-2310 (2002)
• [Publications] Kato-J-Y: "Tumor Suppressing Viruses, Genes and Drugs : Innovative Cancer Therapy Approaches"Academic Press. 21 (2001)