BACシステムを用いた簡便な組み換えヘルペスウイルス作成法の開発

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12556049
• Research Institution: Tokyo Medical and Dental University
• Principal Investigator: 川口 寧 東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 助教授 (60292984)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 前田 健 山口大学, 農学部, 助教授 (90284273) ; 堀本 泰介 東京大学, 医科学研究所, 助教授 (00222282) ; 見上 彪 日本大学, 生物資源科学部, 教授 (20091506) ; 坂口 正士 (財)化学及び血清療法研究所, 第2研究部, 上級研究員
• Keywords: ヘルペスウイルス / 組み換え法 / BAC system

Research Abstract

本研究の目的はヘルペスウイルスの組み換え技術をbacterial artificial chromosome (BAC) system"を用いて簡便な組み換え法を開発することによってヘルペスウイルスの新しいワクチン開発、遺伝子治療ベクターの開発、基礎研究を著しくスピードアップするこことにある。本年度に得られた結果は以下の通りである。
ヘルペスウイルスで最も研究が進んでいる単純ヘルペスウイルス(HSV)のBAC systemを用いた組み換え法の確立を試みた。外来遺伝子の挿入によって影響がでない部位であるUL3とUL4のジャンクション部位にBACmidを挿入した組み換えHSVであるYK301を構築し、YK301ゲノムを保持した大腸菌YEbac101の作製に成功した。YEbac101由来のHSVゲノムをRSCに導入したところ感染性HSV(YK302)の産生が確認された。YK302は、TKを欠損しているがTK欠損野生株Δ305と培養細胞において同等な増殖能力を有していた。YK302のTK領域の修復に成功し、YK303を得た。また、YK303のゲノムを保持する大腸菌(YEbac102)の作製に成功した。YEbac102由来のHSVゲノムをRSCに導入したところ、感染性HSV(YK304)の産生が確認されYK304は野生株と培養細胞において同等な増殖能力を有していた。本年度において、如何なるHSV遺伝子も欠損しないゲノムを有する大腸菌(YEbac102)の作製に成功し、YEbac102由来のウイルスは、野生株と同等な性状を有していることが明らかになった。

Research Products

• [Publications] Y.Kawaguchi et al.: "Herpes simplex virus type 1 α regulatory protein ICPO functionally interacts with a cellular transcription factor BMAL1"Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 98. 1877-1882 (2001)
• [Publications] A.Yokoyama et al.: "Identification of major phosphorylation sites of Epstein-Barr virus nuclear antigen leader protein(EBNA-LP) : The function of EBNA-LP to induce latent membrane protein 1 co-operatively with EBNA-2 is regulated by phosphorylation."Journal of Virology. 75. 5119-5128 (2001)
• [Publications] A.Yokoyama etal.: "The conserved domain CR2 of Epstein-Barr virus nuclear antigen leader protein is responsible not only for nuclear matrix association but also for nuclear 1ocalization"Virology. 279. 401-413 (2001)
• [Publications] K.Kato, et al.: "Eptain-Barr virus encoded-protein kinase BGLF mediates hyper-phosphorylation of cellular elongation factor 1δ (EF-1δ) EF-1δ is universally modified by conserved protein kinases of herpesviruses"Journal of General Virology. 82. 1457-1463 (2001)
• [Publications] M.Tanaka, et al.: "The Conserved region CR2 of Epstein-Barr Virus Nuclear Antigen Leader Protein Is a Multifunctional Domain that mediates Self-Association As Well As nuclear Localization and Nuclear Matrix Association"Journal of Virology. (印刷中).
• [Publications] K.Kato, et al.: "Characterization of the regulatory funetion of the Marek's disease virus serotype 1 ICP22 homologue"Vet. Microbiol.. (印刷中).