2000 Fiscal Year Annual Research Report
薬物の脳内移行検定システムの開発:血液脳関門 in vitro再構築系
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12557009
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| Research Institution | Nagasaki University |
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Principal Investigator |
丹羽 正美 長崎大学, 医学部, 教授 (20136641)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
DELI Maria 日本学術振興会, 外国人特別研究員
山田 亮 (株)ジェイ・エム・エス, 中央研究所, 所長(研究職)
ABRAHAM Sandor 長崎大学, 医学部, 助手 (60315231)
片岡 泰文 九州大学, 医学部, 助教授 (70136513)
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| Keywords | 血液脳関門(BBB) / アストロサイト / 薬物脳内移行 / BBBキット / 抗痴呆薬 |
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| Research Abstract |
血液脳関門(BBB)in vitro再構築系を改良・開発し、薬物の脳内移行率・BBB機能検定のスクーリニング・システム(BBBキット)を完成させるために、先ずパーミアブルサポートの基本構造を検討した。内皮細胞とアストロサイトの混合培養ができるパーミアブルサポートとして改良し、交流電気抵抗計を利用しBBBの機能のうち密着結合による透過性の検定、液相・吸着・受容体介在性エンドサイトーシスも測定できるようになった。また、ポリエステル、ポリカーボネートなど材質の検討、メンブレンフィルターのポアサイズ、コーティングの方法(コラーゲンの選択、フィブロネクチンの可否等)ハードの改良も展開中である。
細胞の選択も完了し、脳血液関門細胞株GP8.3細胞(SV40レトロビールス法で不死化されたラット脳毛細血管内皮細胞由来細胞株、申請者の実験室で株細胞として維持されている)が最適であることが確認できた。混合培養されるアストロサイトは、電気抵抗(密着結合による透過性)を指標に、実験動物(マウス、ラット)から得た初代培養細胞、ラットC6グリオーマ細胞、正常ヒトアストロサイト(Neuro Pack-As、三光純薬(株))などの細胞とマッチングを行った結果、最適な細胞の組み合わせは、GP8細胞とラットC6グリオーマ細胞であることが分かった。また、培養液中のdibutyryl-cAMPが、in vitroで脳血液関門の機能を向上させることを見出しており、引き続き培養条件の改良に努めている。
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[Publications] Juraj Kopacek: "Upregulation of the genes encoding lysozomal hydrolases, a perforin-like protein, and peroxides in the brains of mice affected with an experimental prion disease"Journal of Virology. 74・1. 411-417 (2000)
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[Publications] Kimihiro Yamashita: "Involvement of the glial endothelin/nitric oxide in delayed neuronal death of rat hippocampus after transient forebrain ischemia"Cellular and Molecular Neurobiology. 20・5. 541-551 (2000)
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[Publications] Hirotomo Shibaguchi: "Transient hypoxia/hypoglycemia upregulates of endothelin B receptors in rat cultured astrocytes"Glia. 31・1. 91-94 (2000)
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[Publications] Maria A.Deli: "Pentosan polysulphate regulates scavenger receptor-mediated, but not fluid-phase, endocytosis in immortalized cerebral endothelial cells"Cellular and Molecular Neurobiology. 20・6. 731-745 (2000)
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[Publications] Maria A.Deli: "Prion protein fragment 106-126 is toxic to cerebral endothelial cells expressing cellular prion protein"NeuroReport. 11・17. 3931-3936 (2000)
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[Publications] Maria A.Deli: "Tissue plasminogen activator inhibits P-glycoprotein in brain endothelial cells"European Journal of Pharmacology. 411. R3-R5 (2001)
