2001 Fiscal Year Annual Research Report

全NO関連物質の同時測定システムの開発

Research Project

Project/Area Number	12557010
Research Institution	Kumamoto University
Principal Investigator	赤池孝章熊本大学, 医学部, 助教授 (20231798)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	前田浩熊本大学, 医学部, 教授 (90004613) 西野博仁株式会社エイコム, 取締役開発部長(研究職) 宮本洋一熊本大学, 医学部, 助手 (20295132) 小川道雄熊本大学, 医学部, 教授 (30028691)
Keywords	NO / NO関連物質 / ニトロチロシン / ニトロトリプトファン / ニトログアニン / 電気化学検出法 / HPLC / パーオキシナイトライト
Research Abstract	NO関連物質の中で、現在定量可能な代謝物は、亜硝酸イオン/硝酸イオンやニトロソチオールのような一部の物質にかぎられており、これまで各々のNO関連物質のすべてを同時に測定することにより生体内のNO生成動態を詳細に解析した報告はない。本研究では、生体試料中に存在する全NO関連物質の定量システムを開発することを目的とする。このため本年度は、NO由来の反応性窒素酸化物であるパーオキシナイトライト(ONOO^-)により生じる一連のニトロ化付加体であるニトロチロシン、ニトロトリプトファン、ニトログアニンなどの化合物の検出システムを構築した。具体的には、逆相HPLCによる各物質の分離後に2つの電気化学検出器を直列して設置し、上流側電極に-900mVの還元電圧、下流側電極に+300mVの酸化電圧を加え、下流側電極における酸化電流により検出する定量的測定法を開発した。この測定系では、例えば、ニトロチロシンの測定感度は5×10^<-15>molと非常に高く、還元電圧変更によるピーク消失により特異性も評価可能であった。また、低い測定電圧は夾雑ピークを減少させ、生体試料の測定でも安定した結果が得られた。また、この方法により、気管支喘息や慢性気管支炎の吸入誘発痰やウイルス感染マウスの肺洗浄液中のニトロチロシン測定に成功した。この方法は、生体内各種ニトロ付加体の定量法として特異性、安定性に優れ、臨床応用への展開が期待できる。

Research Products
(12 results)

All Other

All Publications (12 results)

[Publications] T.Akaike: "Free Radical in viral pathogenesis and mutaiton"Rev. Med. Virol.. 11. 87-101 (2001)
[Publications] Okamoto, T., Akaike, T.et al.: "Activation of matrix metalloproteinases by peroxynitrite-induced protein S-glutathiolation via disulfide S-oxide formation"J. Biol. Chem.. 276. 29596-29602 (2001)
[Publications] Miyajima, S., Akaike, T.et al.: "Matrix metalloproteinases induction by pseudomonal virulence factors and inflammatory cytokines in vitro"Microb. Pathog.. 31. 271-281 (2001)
[Publications] Uwatoku, R., Akaike, T.et al.: "Asialoglycoprotein receptors on rat dendritic cells : possible roles for binding with Kupffer cells and ingesting virus particles"Arch. Histol Cytol.. 64. 223-232 (2001)
[Publications] Satoh, S., Oishi, K., Iwagaki, A., Senba, M, Akaike, T.et al.: "Dexamethazone impairs pulmonary defense against Pseudomonas aeruginosa through suppressing iNOS gene expression and peroxynitrite production in mice"Clin. Exp. Immunol.. 126. 266-273 (2001)
[Publications] 赤池孝章: "一酸化窒素(NO)による感染防御と病態形成に関する研究"日本細菌学会誌. 56. 503-511 (2001)
[Publications] Wu, J., Akaike, T., et al.: "Enhanced vascular permeability in solid tumor involving peroxynitrite and matrix metalloproteinases"Jpn. J. Cancer Res.. 92. 439-451 (2001)
[Publications] Wu, J., Akaike, T.et al.: "Identification of bradykinin receptors in clinical cancer specimens and murine tumor tissues"International J. Cancer. 98. 29-35 (2002)
[Publications] Alam, M.S., Akaike, T.et al.: "Host defense role of nitric oxide in murine salmonellosis as a function of its antibacterial and antiapoptotic activities"Infect. Immun.. (in press). (2002)
[Publications] Fang, J., Sawa, T., Akaike, T.et al.: "Tumor-targeted delivery of PEG-conjugated D-amino acid oxidase for antitumor therapy via enzymatic generation of hydrogen peroxide"Cancer Res.. (in press). (2002)
[Publications] 赤池孝章: "内山竹彦, 中嶋暉躬, 名取俊二, 正木春彦編. 生物間の攻撃と防御の蛋白質(蛋白質核酸酵素) Vol.46"共立出版(株)東京. 524-531 (2001)
[Publications] 赤池孝章: "感染症におけるNO代謝制御. 吉川敏一編. 酸化ストレス:フリーラジカル医学生物学の最前線(医学のあゆみ別冊)"医歯薬出版(株)東京. 162-165 (2001)

2001 Fiscal Year Annual Research Report

全NO関連物質の同時測定システムの開発

Principal Investigator

赤池 孝章 熊本大学, 医学部, 助教授 (20231798)

Research Products

[Publications] T.Akaike: "Free Radical in viral pathogenesis and mutaiton"Rev. Med. Virol.. 11. 87-101 (2001)

[Publications] Okamoto, T., Akaike, T.et al.: "Activation of matrix metalloproteinases by peroxynitrite-induced protein S-glutathiolation via disulfide S-oxide formation"J. Biol. Chem.. 276. 29596-29602 (2001)

[Publications] Miyajima, S., Akaike, T.et al.: "Matrix metalloproteinases induction by pseudomonal virulence factors and inflammatory cytokines in vitro"Microb. Pathog.. 31. 271-281 (2001)

[Publications] Uwatoku, R., Akaike, T.et al.: "Asialoglycoprotein receptors on rat dendritic cells : possible roles for binding with Kupffer cells and ingesting virus particles"Arch. Histol Cytol.. 64. 223-232 (2001)

[Publications] Satoh, S., Oishi, K., Iwagaki, A., Senba, M, Akaike, T.et al.: "Dexamethazone impairs pulmonary defense against Pseudomonas aeruginosa through suppressing iNOS gene expression and peroxynitrite production in mice"Clin. Exp. Immunol.. 126. 266-273 (2001)

[Publications] 赤池孝章: "一酸化窒素(NO)による感染防御と病態形成に関する研究"日本細菌学会誌. 56. 503-511 (2001)

[Publications] Wu, J., Akaike, T., et al.: "Enhanced vascular permeability in solid tumor involving peroxynitrite and matrix metalloproteinases"Jpn. J. Cancer Res.. 92. 439-451 (2001)

[Publications] Wu, J., Akaike, T.et al.: "Identification of bradykinin receptors in clinical cancer specimens and murine tumor tissues"International J. Cancer. 98. 29-35 (2002)

[Publications] Alam, M.S., Akaike, T.et al.: "Host defense role of nitric oxide in murine salmonellosis as a function of its antibacterial and antiapoptotic activities"Infect. Immun.. (in press). (2002)

[Publications] Fang, J., Sawa, T., Akaike, T.et al.: "Tumor-targeted delivery of PEG-conjugated D-amino acid oxidase for antitumor therapy via enzymatic generation of hydrogen peroxide"Cancer Res.. (in press). (2002)

[Publications] 赤池孝章: "内山竹彦, 中嶋暉躬, 名取俊二, 正木春彦編. 生物間の攻撃と防御の蛋白質(蛋白質 核酸 酵素) Vol.46"共立出版(株)東京. 524-531 (2001)

[Publications] 赤池孝章: "感染症におけるNO代謝制御. 吉川敏一編. 酸化ストレス:フリーラジカル医学 生物学の最前線(医学のあゆみ 別冊)"医歯薬出版(株)東京. 162-165 (2001)

赤池孝章熊本大学, 医学部, 助教授 (20231798)

[Publications] 赤池孝章: "内山竹彦, 中嶋暉躬, 名取俊二, 正木春彦編. 生物間の攻撃と防御の蛋白質(蛋白質核酸酵素) Vol.46"共立出版(株)東京. 524-531 (2001)

[Publications] 赤池孝章: "感染症におけるNO代謝制御. 吉川敏一編. 酸化ストレス:フリーラジカル医学生物学の最前線(医学のあゆみ別冊)"医歯薬出版(株)東京. 162-165 (2001)