2002 Fiscal Year Annual Research Report
がん治療薬新規分子標的と新規抗がん剤探索のためのヒトがん関連遺伝子導入ハエの樹立に関する総合的研究
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12557013
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| Research Institution | Kyoto Institute of Technology |
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Principal Investigator |
山口 政光 京都工芸繊維大学, 繊維学部, 教授 (00182460)
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| Keywords | 複製関連遺伝子 / 骨髄性白血病因子 / COP9シグナロソーム / GSTプルダウンアッセイ / PCIドメイン / 遺伝子導入ショウジョウバエ |
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| Research Abstract |
ショウジョウバエの複製関連遺伝子を共通に制御する転写因子DREFをベイトに用いたtwo-hybrid法で、ヒト骨髄性白血病因子hMLF1(myelodysplasia/myeloid leukemia factor 1)のショウジョウバエホモログであるdMLFを同定した。また、hMLF1をベイトとしたtwo-hybridスクリーニングから、COP9シグナロソーム複合体のサブユニットであるCSN3が相互作用因子として同定されている。COP9シグナロソームは8つのサブユニットからなる進化的に保存されたタンパク質複合体であるが、生理学的な機能はまだ明らかになっていない。このCSN3のショウジョウバエホモログがdCSN3であり、dMLFもまたdCSN3と直接結合することが確認されているが、dMLF、dCSN3とも具体的な機能については不明である。本年度は、dMLFとdCSN3の相互作用を検討するために、それぞれのタンパク質に存在する結合領域をGSTプルダウンアッセイによって決定した。まずGST融合タンパク質としてdCSN3およびdMLFの種々の欠失変異体を作製し、一方で^<35>SラベルのdMLF、dCSN3タンパク質をin vitro合成した。GST-dCSN3欠失変異体と^<35>SラベルdMLFを用いたGSTプルダウンアッセイから、dMLFがdCSN3のC末端領域に存在するPCIドメインに強く結合することが明らかとなった。またGST-dMLF欠失変異体と^<35>SラベルdCSN3を用いたプルダウンアッセイの結果から、dCSN3はdMLFのN末端領域のアミノ酸1-202部分に結合することが示唆された。また、dCSN3のPCIドメイン領域のポリペプチドをショウジヨウバエ個体で発現させることができる遺伝子導入ショウジョウバエ系統を本年度新たに樹立した。
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[Publications] Higashiyama, H., et al.: "Identification of ter94, Drosophila VCP, as a modulator of polyglutamine-induced eye degeneration"Cell Death Differ.. 9. 264-273 (2002)
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[Publications] Hirose, F., et al.: "Drosophila Mi-2 negatively regulates dDREF by inhibiting its DNA binding activity"Mol. Cell. Biol.. 22. 5182-8193 (2002)
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[Publications] Hwang M.-S., et al.: "The Caudal homeodomain protein activates Drosophila E2F gene expression"Nucleic Acids Res.. 23. 5029-5035 (2002)
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[Publications] Kwon, E., et al.: "Transcription control of a gene for Drosophila transcription factor, DREF by DRE and cis-elements conserved between Drosophila melanogaster and virilis"Gene. (in press). (2003)
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[Publications] 山口政光: "ゲノムの複製と分配(松影昭夫・正井久雄編)"シュプリンガー・フエアラーク東京. 234 (2002)
