プロテイン・トランスダクションによるC型肝炎治療法の開発

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12557052
• Research Institution: The University of Tokyo
• Principal Investigator: 小池 和彦 東京大学, 医学部・附属病院, 助教授 (80240703)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 藤江 肇 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 ; 新谷 良澄 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 ; 森屋 恭爾 東京大学, 医学部・附属病院, 講師 (00272550) ; 石橋 光太郎 第一製薬中央研究所, 試験研究センター, 主任研究官 ; 松浦 善治 大阪大学, 微生物病研究所, 教授
• Keywords: C型肝炎 / プロテイン・トランスダクション / プロテアーゼ / トランスジェニックマウス / カスパーゼ

Research Abstract

最近、ヒト免疫不全ウイルス(HIV)のTAT蛋白のうち、N末端の11アミノ酸であるprotein transducing domain(ptd)に融合させた各種蛋白が、マウスへの腹腔内投与によって全身の臓器に分布されることが明らかにされている。このptd配列の後ろに、C型肝炎ウイルス(HCV)のNS3プロテアーゼによって切断されるペプチドを介在させてカスパーゼ3に結合させることによって、HCVの感染した(NS3プロテアーゼを発現した)細胞でのみカスパーゼ3が活性化され、細胞死をもたらすことが可能となる。カスパーゼ3は切断された後へテロ四量体となって初めて活性化されるためである。HCVの感染していない細胞ではNS3プロテアーゼが存在しないため、カスパーゼ3は活性化されず細胞は障害されない。インターフェロン治療によってHCVに感染した肝細胞が高度に減少している患者にこのポリペプチドを投与することによって、HCV感染肝細胞を排除して慢性C型肝炎を治癒させることが可能である。一方、我々はHCVのNS3プロテアーゼを肝において発現しているHCV非構造領域遺伝子(NS)トランスジェニックマウスを既に樹立している。このマウスをモデルとして用いて、プロテイン・トランスダクションによるC型肝炎治療法を開発する。カスパーゼ3発現コンストラクトpTAT-Casp3-NS3pcsの作製。HIV-1のTAT蛋白のうちprotein transducing domain(ptd)を、カスパーゼ3のPro領域を取り除いた部分に結合する。これにNS3プロテアーゼ切断領域(NS3-NS4A境界)配列を挟んでカスパーゼ3のp17、さらにNS3プロテアーゼ切断領域(NS4B-NS5A境界)配列を挟んでp12を発現する構造である。本コンストラクトを現在作成中である。

Research Products

• [Publications] Shintani Y, et al.: "Significance of hepatitis B virus DNA detected in hepatocellular carcinoma in patients with hepatiits C."Cancer. 88. 2478-2486 (2000)
• [Publications] Yotsuyanagi H, et al.: "Virological analysis of "non-B, non-C" hepatocellular carcinoma in Japan : frequent involvement of hepatitis B virus."J Infect Dis. 181. 1920-1928 (2000)
• [Publications] Fujie H, et al.: "Hepatitis B virus genotypes and hepatocellular carcinoma in Japan."Gastroenterology. (in press). (2001)
• [Publications] Moriya K, et al.: "Increase of carbon 18 mono-unsaturated fatty acids in the liver of hepatitis C : Analysis in transgenic mice and humans."Biophys Biochem Res Commun. (in press). (2001)
• [Publications] Moriya K, et al.: "Oxidative stress in the absence of inflammation in the liver of a mouse model for hepatitis C virus-associated hepatocellular carcinoma."Cancer Res. (in press). (2001)
• [Publications] Fujie H, et al.: "Frequent β-catenin aberration in human hepatocelluar carcinoma."Hepatol Res. (in press). (2001)