プロテイン・トランスダクションによるC型肝炎治療法の開発

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12557052
• Research Institution: The University of Tokyo
• Principal Investigator: 小池 和彦 東京大学, 医学部・附属病院, 助教授 (80240703)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 藤江 肇 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 ; 新谷 良澄 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 ; 森屋 恭爾 東京大学, 医学部・附属病院, 講師 (00272550) ; 石橋 光太郎 第一製薬, 中央研究所・試験研究センター, 主任研究官 ; 松浦 善治 大阪大学, 微生物病研究所, 教授
• Keywords: C型肝炎 / プロテイン・トランスダクション / プロテアーゼ / トランスジェニックマウス / カスパーゼ

Research Abstract

ヒト免疫不全ウイルスのTAT蛋白のうち、N末端の11アミノ酸であるprotein transducing domain (ptd)に融合させた各種蛋白は、マウスへの腹腔内投与によって全身の臓器に分布される。ptd配列の後ろに、C型肝炎ウイルス(HCV)のNS3プロテアーゼによって切断されるペプチドを介在させてカスパーゼ3に結合させることによって、HCV感染細胞でのみカスパーゼ3が活性化され、細胞死をもたらすことが可能となる。HCVの感染していない細胞ではNS3プロテアーゼが存在しないため、カスパーゼ3は活性化されず細胞は障害されない。インターフェロン治療によってHCV感染肝細胞が高度に減少するも撲滅されていない患者に、本ポリペプチドを投与することによって、HCV感染肝細胞を排除して慢性C型肝炎を治癒させることが可能である。
カスパーゼ3発現コンストラクトpTAT-Casp3-NS3pcsを以下のごとく作成した。HIV-1のTAT蛋白のうちprotein transducing domain (ptd)を、カスパーゼ3のPro領域を取り除いた部分に結合する。これにNS3プロテアーゼ切断領域(NS3-NS4A境界)配列を挟んでカスパーゼ3のp17、さらにNS3プロテアーゼ切断領域(NS4B-NS5A境界)配列を挟んでp12を発現する。これを大腸菌に発現させ精製した。
一方、我々はHCVのNS3プロテアーゼを肝で発現しているHCV非構造領域遺伝子(NS)トランスジェニックマウスを樹立した。このマウス肝では、NS2からNS5BまでのHCVタンパクが低レベルに発現しており、C型肝炎ウイルス増殖の基礎モデルとなっている。プロテイン・トランスダクションによるC型肝炎治療法開発のため、このマウスモデルにptd結合カスパーセ・ペプチドを投与している。

Research Products

• [Publications] Koike K, et al.: "Role of hepatitis viruses in hepatocarcinogenesis"Oncology. 62. 29-37 (2002)
• [Publications] Yotsuyanagi H, et al.: "Frequent presence of hepatitis B virus in the sera from HBs antigen-negative, anti-HBc-positive blood donors"Transfusion. 9. 1093-1099 (2001)
• [Publications] Fujie H, et al.: "Hepatitis B virus genotypes and hepatocellular carcinoma in Japan"Gastroenterology. 120. 1564-1565 (2001)
• [Publications] Moriya K, et al.: "increase of carbon 18 mono-unsaturated fatty acids in the liver of hepatitis C : Analysis in transgenic mice and humans"Biophys Biochem Res Commun. 281. 1207-1212 (2001)
• [Publications] Moriya K, et al.: "Oxidative stress in the absence of inflammation in the liver of a mouse modelf or hepatitis C virus -associated hepatocellular carcinoma"Cancer Res. 61. 4365-4370 (2001)
• [Publications] Fujie H, et al.: "Frequent β-catenin aberration in human hepatocellular carcinoma"Hepatol Res. 20. 39-51 (2001)