2002 Fiscal Year Annual Research Report
下垂体の転写因子間ネットワークの解析と細胞形質の改変
Project/Area Number |
12557087
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Research Institution | Meiji University |
Principal Investigator |
加藤 幸雄 明治大学, 農学部, 教授 (30114177)
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Keywords | 下垂体 / 生殖腺刺激ホルモン / 生殖腺刺激ホルモン / 性腺刺激ホルモン / 遺伝子 / 生殖 |
Research Abstract |
平成14年度は表記課題を達成するための準備期間として、下記のような実験を進めた。 1)下垂体で発見された48種の転写因子クローンのコレクションのDNAの整理し、それぞれのクローンを大腸菌にトランスフォーメーションして、クローンの保存を行った。 2)それぞれのベクターの特異プライマーを設計・合成して、塩基配列を決定し、30種のクローンについて、発現ベクターに組み込むために合成プライマーを作製して、コード領域を増幅をし、18種のクローンについて発現ベクター各種に挿入した。 3)転写因子間相互作用の解析を展開するために、酵母の発現系を確立し、転写因子のcDNAをpBDGAL4に組み込み、pADGAL4に組み込んだ下垂体cDNAライブラリーとともに酵母細胞に導入して発現させて、相互作用因子のクローニングを行った。その結果、LH2にはCLIM2が相互作用することが判明した。さらに、CLIM2に対する相互作用分子をクローニングし、LHと共通するドメイン構造LIMを持つ複数の分子が結合することを明らかにした。また、そうした構造を持たない基本転写因子群に含む分子が新たにクローニングされ、下垂体ホルモン遺伝子発現に関わる転写因子ネットワークの一端が明らかになった。 4)転写因子の下垂体ホルモン遺伝子の発現調節への機能を解析するために、培養細胞発現系を整えた。F生殖腺刺激ホルモン遺伝子の転写開始点上流をアルカリフォスファターゼに連結したレポーターベクターを用いて、CHO細胞やLβT2細胞に転写因子を発現させて調べた。その結果、複数の因子がホルモン遺伝子の転写を促進すること、いくつかは抑制的に働くこと、また、協調した転写促進などが確認でき、そうした転写因子の転写ネットワークの全体像の解明を進めている。
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[Publications] Hattori MA: "Retinoic acid suppression of endothelial nitric oxide synthase in porcine oocyte"Can J Physiol Pharmacol. 80. 777-782 (2002)
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[Publications] Hattori, M-A.: "Preferential expression of ADP-ribosylation factor gene in the chick embryonic gonads"Life Science. 70. 2031-2037 (2002)
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[Publications] Hattori, M-A.: "Prominent expression by of transforming growth factor β2 gene in the chicken embryonic gonad as revealed suppressive subtraction clonin"Gen Comp Endocrinol 2002 ; 125 : 311-316. 125. 311-316 (2002)
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[Publications] Iwasawa A: "Changes in thyrotropin messenger RNA and circulating hormone levels during induced molting of the hen (Gallus domesticus)"J Reprod Dev 2002 ; 48 : 489-496. 48. 489-496 (2002)
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[Publications] Iwasawa A: "Specific anti-peptide antibody to βsubunit of chicken thyrotropin : production and characterization"Endocr J. 48. 197-204 (2002)
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[Publications] Tomizawa K: "Production and Characterization of an Antiserum against Recombinant Porcine Follicle Stimulating Hormone"J Reprod Dev 2002 ; 48 : 131-136. 48. 131-136 (2002)
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[Publications] Soh T: "Utilization of central disk of blastoderm and germinal crescent region for production of interspecific germline chimera between chicken and quail"Asian J Andorol 2002 ; 4 :83-6. 4. 83-86 (2002)
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[Publications] Kato Y: "Presence of an 85 kDa pituitary protein (Pit-G) in porcine GH-producing cells"J Reprod Dev 2002 ; 48 : 87-95. 48. 87-95 (2002)
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[Publications] Aikawa S: "Molecular Cloning of Porcine Neuronatin and Analysis of Its Expression during Pituitary Ontogeny"Endocrinol.Diabetes. (印刷中).
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[Publications] 本比較内分泌学会 編: "ブルーバックス「生命をあやつるホルモン」(共著)"講談社. 20 (2003)