脳腫瘍特異抗原遺伝子のクローニングと免疫遺伝子治療への応用

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12557120
• Research Institution: Keio University
• Principal Investigator: 戸田 正博 慶応義塾大学, 医学部, 助手 (20217508)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 肥塚 靖彦 キリンビール医薬探索研究所, 薬理評価グループ, 主任研究員(研究職) ; 河瀬 斌 慶応義塾大学, 医学部, 教授 (40095592) ; 河上 裕 慶応義塾大学, 医学部, 教授 (50161287)
• Keywords: グリオーマ / 抗原 / 遺伝子 / 血清 / HSV / vector / サイトカイン

Research Abstract

悪性脳腫瘍は極めて治療困難な疾患であり、現在まで有効な治療法がない。そこで申請者らは新たなアプローチとして、脳腫瘍に対する腫瘍抗原特異的な免疫遺伝子治療を提案している。本研究では第一に新規の脳腫瘍特異抗原遺伝子の単離を目的として、グリオーマ患者血清を用いてautologous typingに分子生物学的手法を取り入れたSEREX(Serological identification of antigens by recombinant expression cloning)法による解析を試みた。患者一症例につき5x10^5個のファージを12例のグリオーマ患者血清を用いてスクリーニングした結果、92個の陽性クローンを単離し、塩基配列解析により、それらの抗原は52種の遺伝子をコードしていることが明らかになった。さらに単離された抗原を、様々な患者(グリオーマ患者、他の癌患者、他の脳疾患患者、および健常人)血清中IgGとの反応を解析し、グリオーマを含む癌患者のみ反応する新規遺伝子KU-GB-1の全長を単離した。
一方、癌ワクチンに用いるベクターとして、in situで遺伝子導入効率が高く、腫瘍細胞中でのみ選択的に複製するreplication-conditional HSV、G207をヘルパーウイルスとして用いて、サイトカイン遺伝子(GM-CSF及びIL-12)をamplicon vector組み込んだdefective HSV vectorシステムを作製した。

Research Products

• [Publications] Kojima,H.: "Anti-Thy-1 mAb-triggered FasL/Fas-mediated cytotoxicity of T cells requires intact TCR/CD3 signaling pathway. Lower threshold for triggering of Fas-mediated versus perforin-mediated cytotoxicity."Int.Immunol.. 12. 365-374 (2000)
• [Publications] Toda,M.: "Tumor growth inhibition by intratumoral inoculation of defective herpes simplex virus vectors expressing granulocyte-macrophage colony-stimulating factor."Mol Ther . 2. 324-329 (2000)
• [Publications] Suzuki,A: "Multiple in situ Cancer Vaccinations with HSV and IL-12 Synergize to Facilitate Tumor Regression."Proc.Am.Assoc.Cancer Res.. 41. 469 (2000)
• [Publications] Toda,M: "Identification and characterization of human brain tumor antigens : a potential target for specific immunotherapy and diagnostic marker."Proc.Am.Assoc.Cancer Res.. 41. 710 (2000)
• [Publications] Endo,T: "In situ cancer vaccination with a mutant HSV for the treatment of liver metastasis of colon cancer."Proc.Am.Assoc.Cancer Res.. 41. 798 (2000)
• [Publications] Takahashi,S: "Characterization of tumor antigens recognized by IgG antibody in patients with glioma using SEREX."Proc.Am.Assoc.Cancer Res.. 41. 880 (2000)
• [Publications] Toda,M.: "Combination Suicide/cytokine gene therapy as adjuvants to Defective Herpes Simplex Virus-Based Cancer Vaccine."Gene Ther. (in press). (2001)
• [Publications] Toda,M: "Expression of the Neural RNA-Binding Protein Musashil in Human Gliomas."Glia. (in press). (2001)