2000 Fiscal Year Annual Research Report
ヒト組み換えタンパク質の発現系を応用した新規歯周組織再生補填剤の開発
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12557195
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| Research Institution | Kanagawa Dental College |
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Principal Investigator |
斎藤 正寛 神奈川歯科大学, 歯学部, 講師 (40215562)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
角田 晃 神奈川歯科大学, 歯学部, 助手 (70236933)
山内 雅人 神奈川歯科大学, 歯学部, 助手 (30230311)
鈴木 元 神奈川歯科大学, 歯学部, 講師 (80236017)
笹栗 健一 神奈川歯科大学, 歯学部, 助手 (10235286)
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| Keywords | 骨シアロ蛋白質 / 組み換え蛋白質 / 再生 / 発生 / 歯周病 / 分子生物学 |
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| Research Abstract |
我々は新たな歯周病再生治療の開発のため、ヒトセメント質構成成分である骨シアロタンパク質(BSP)の組み換え蛋白質を作製し、新規補填材として開発可能か否かを検討する実験計画を立案した。今回我々は翻訳後修飾された組み換え蛋白質の大量発現が可能なバキュロウイルス発現系を用いてヒト組み換えBSPの発現を試みた。第一段階として神奈川歯科大学付属病院に来院した患者より採取した発生期永久智歯歯胚からRNAを抽出し、ヒトBSPcDNAをPCR法でクローニングした。増幅されたPCR産物をTAベクターにサブクローニングを行ない、DNA配列を解析し得られたヒトBSPcDNAのDNA配列が既知のと同一であるか否かを確認した。次にヒトBSPcDNAを基にバキュロウイルスベクターを作製し、昆虫細胞であるsf-9に遺伝子導入を行ないヒトBSPの発現を試みた。その結果ヒトBSPは分子量55kDaおよび60kDaの蛋白質として発現されることが確認された。得られたヒトBSP組み換え蛋白質の生理活性を調べるため、遺伝子導入した昆虫細胞より蛋白質を精製しウシ歯小嚢細胞に対する細胞接着活性試験を行うと、ヒトBSP組み換え蛋白質は有意に高い細胞接着活性を示した。これらの結果よりバキュロウイルス発現系はヒトBSP組み換え蛋白質の作製に適したシステムであることが確認された。平成13年度は大量発現および細胞接着活性をコントロールするアミノ酸配列に対する変異体を作製し、BSPのセメント質形成へのさらなる関わり合いをin vitroおよびin vivoの実験系で解析し、歯周病補填材への開発への可能性を検討していく予定である。
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[Publications] K.Handa,A.Tsunoda,M.Saito,M.Yamauchi,K.Sasaguri and T.Teranaka: "Characterization of Bovine Dental Follicle Cells isolated from Tooth Germ"The Bulletin of Kanagawa Dental College. Vol28・1. 26-29 (2000)
