自己免疫疾患ランバート・イートン筋無力症モデル動物の開発と病因メカニズムの解析

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12557216
• Research Institution: THE UNIVERSITY OF TOKYO
• Principal Investigator: 桐野 豊 東京大学, 大学院・薬学系研究科, 教授 (10012668)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 松尾 亮太 東京大学, 大学院・薬学系研究科, 助手 (40334338) ; 渡邊 恵 東京大学, 大学院・薬学系研究科, 助手 (80302610) ; 川原 茂敬 東京大学, 大学院・薬学系研究科, 助教授 (10204752) ; 川上 善之 エーザイ(株), 筑波研究所, 主幹研究員 ; 佐藤 一紀 福岡女子大学, 人間環境部, 教授 (10326473)
• Keywords: カルシウムチャネル / 自己免疫疾患

Research Abstract

1.電位依存性P型Caチャネルの細胞外ドメインに対するポリクローナルペプチド抗体を作製し、免疫に用いたものと同じペプチドを共有結合させたカラムでIgGを精製した。
2.電位依存性P型Caチャネルを安定的に強制発現させたHEK293細胞に上記抗体を作用させ、24時間おいた後蛍光顕微鏡下でFura-2-AMを用いた細胞内カルシウムイメージングを行ったところ、高カリウム刺激によるカルシウム流入が無処理の細胞に比べて減少していた。この結果は抗体処理によるチャネル数の減少か、各チャネルのコンダクタンスの低下を示唆している。
3.上記HEK293細胞上の電位依存性P型Caチャネルを、蛍光ラベルされたω-agatoxinによって標識後、上記抗体を作用させ、24時間おいた後蛍光顕微鏡下で細胞表面上の蛍光を観察したところ、無処理の細胞に比べて蛍光の減少が見られた。このことから、抗体処理により、細胞表面上のチャネル数が減少したことが明らかになった。
4.ランバート・イートン筋無力症患者、および健常人の血清からProtein Aセファロースカラムを用いてそれぞれIgGを精製し、得られた抗体を用いて2.と同様の実験を行ったところ、患者由来の抗体ではカルシウム流入の減少が顕著に見られたが、健常人由来の血清でも若干の低下が見られた。

Research Products

• [Publications] Kanako Takatsuki et al.: "Scopolamine impairs eyeblink conditioning in the cerebellar LTD-deficient mice"NeuroReport. 13. 159-162 (2002)
• [Publications] Kanako Takatsuki et al.: "Hippocampal damage disrupts eyeblink conditioning in mice lacking glutamate receptor subunit d2"J. Biol. Phys.. 28. 539-547 (2002)
• [Publications] Yasuko Inokuma et al.: "Two Types of Network Oscillations and Their Odor Responses in the Primary Olfactory Center of a Terrestrial Mollusk"J. Neurophysiol.. 87. 3160-3164 (2002)
• [Publications] Kaori Takehara et al.: "Time-limited role of the hippocampus in the memory for trace eyeblink conditioning in mice"Brain Res.. 951. 183-190 (2002)
• [Publications] Sadaharu Kotani et al.: "Classical eyeblink conditioning in the decerebrate guinea pigs"Eur. J. Neurosci.. 15. 1267-1270 (2002)
• [Publications] Hidenori Taru et al.: "Interaction of Alzheimer's b-amyloid precursor family proteins with scaffold proteins of the JNK signaling cascade"J. Biol. Chem.. 277. 20070-20078 (2002)
• [Publications] Hidenori Taru et al.: "Differential roles of JIP scaffold proteins in the modulation of amyloid precursor protein metabolism"J. Biol. Chem.. 277. 27567-27574 (2002)
• [Publications] Sotaro Shibayama et al.: "Identification of a C-terminal region that is required for the nuclear translocation of ERK2 by passive diffusion"J. Biol. Chem.. 277. 37777-37782 (2002)
• [Publications] Ryota Matsuo et al.: "Delayed-onset amnesia caused by protein synthesis inhibition in odor-taste associative memory of the terrestrial slug Limax valentianus"Neurosci. Lett.. 334. 201-205 (2002)
• [Publications] Yasushi Kishimoto et al.: "mGluR1 in cerebellar Purkinje cells is required for normal association of temporally contiguous stimuli in classical conditioning"Eur. J. Neurosci.. 16. 2416-2424 (2002)
• [Publications] Satoshi Shimozono et al.: "Confocal imaging of subcellular Ca^<2+> concentrations using a dual-excitation ratiometric indicator based on green fluorescent protein"Sci. STKE. 2002. 14 (2002)
• [Publications] Kanako Takatsuki et al.: "The hippocampus plays an important role in eyeblink conditioning with a short trace interval in glutamate receptor subunit d2 mutant mice"J. Neurosci.. 23. 17-22 (2003)
• [Publications] 桐野 豊: "瞬目反射連合学習を担う脳の領域"パリティ. 18. 52-53 (2003)
• [Publications] 渡辺 恵, 桐野 豊: "ナメクジの匂い学習のメカニズム"Aroma Research. (in press).
• [Publications] Sadaharu Kotani et al.: "Trace eyeblink conditioning in decerebrate guinea pigs"Eur. J. Neurosci.. (in press).
• [Publications] Satoshi Watanabe et al.: "Contribution of excitatory chloride conductance in the determination of the direction of traveling waves in an olfactory center"J. Neurosci.. (in press).