2001 Fiscal Year Annual Research Report
温度感受性SV40T抗原遺伝子導入ラットを用いた血液網膜関門培養細胞実験系の開発
| Project/Area Number |
12557226
|
|---|
| Research Institution | Toyama Medical and Pharmaceutical University |
|---|
Principal Investigator |
細谷 健一 富山医科薬科大学, 薬学部, 教授 (70301033)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
河津 剛一 参天製薬, 眼科研究所・動態研究グループ, マネージャー(研究職)
帯刀 益夫 東北大学, 加齢医学研究所, 教授 (10099971)
片山 和憲 富山医科薬科大学, 薬学部, 助教授 (70126514)
|
|---|
| Keywords | Muller細胞株 / 条件的不死化細胞株 / 血液網膜関門 / GLAST / system xc^- / 培養細胞株 / 酸化的ストレス |
|---|
| Research Abstract |
温度感受性SV40 T抗原遺伝子導入トランスジェニックラット(tsA58 TG rat)から条件的不死化網膜Muller細胞株(TR-MUL)を樹立することを目的とした。tsA58 TG rat 2匹から候補株TR-MULを5株単離した(TR-MUL1〜5)。これらクローンは初代培養したラットMuller細胞と同じ形態である、棒状の形状を示した。TR-MUL細胞はSV40 T抗原が発現し、33度ではdoubling-time30時間で増殖した。37度ではdoubling-timeが46時間に増加し、39度では細胞は増殖せずに細胞数が減少した。TR-MUL細胞は、SV40 T抗原による温度依存的な増殖性が示され、条件的不死化細胞株であることが示唆された。酸性アミノ酸輸送系でin vivo Muller細胞に発現していることが報告されているGLASTがmRNAレベルで、L-glutamic acid(L-Glu)をL-glutamineに変換する酵素、glutamine synthetaseの発現がmRNAおよびタンパクレベルで示された。さらに、グリア細胞のマーカーで酸性タンパクであるS-100の発現がmRNAレベルで示された。一方、同じ酸性アミノ酸輸送担体でもin vivo Muller細胞に発現していないと報告されているGLT-1の発現はRT-PCRで示されなかった。このことから、樹立したTR-MULは少なくとも一部はin vivoにおけるMuller細胞の性質を保持していることが示唆された。さらに、酸性アミノ酸L-GluとL-cystineの交換輸送系であるsystem xc^-の発現をRT-PCRで解析したところ、system xc^-を構成するmRNAであるxCTと4F2hcの発現が示された。このxCT遺伝子はdiethyl maleateを用いた酸化的ストレス条件下で12時間培養することで6倍誘導されることが示された。以上のことから、tsA58 TG ratから少なくと一部はin vivoの性質を保持したTR-MUL細胞株が樹立できた。さらに、TR-MUL細胞はsystem xc^-を発現し、diethyl maleate処理による酸化的ストレス条件下でsystem xc^-遺伝子が誘導されることが明らかとなった。
|
Research Products
(5 results)
-
[Publications] T. Terasaki: "Conditionally immortalized cell lines as a new in vitro model for the study of barrier functions"Biol. Pharm. Bull.. 24. 111-118 (2001)
-
[Publications] 細谷健一: "血液網膜関門及び血液脳関門の再構築とドラッグデリバリー研究への応用"Drug Delivery Syst.. 16. 29-38 (2001)
-
[Publications] K. Hosoya: "MCT1-mediated transport of L-lactic acid at the inner blood-retinal barrier : a possible route for delivery of monocarboxylic acid drugs to the retina"Pharm. Res. 18. 1669-1676 (2001)
-
[Publications] K. Hosoya: "Activation of carrier-mediated transport of L-cystine at the blood-brain and blood-retinal barriers in vivo"Microvasc. Res.. 62. 136-142 (2001)
-
[Publications] K. Tetsuka: "Acidic amino acid transport caracteristics in newly developed conditionally immortalized rat type 2 astrocyte cell line (TR-AST)"Cell Struc. Func.. 26. 197-203 (2001)
