2003 Fiscal Year Annual Research Report
温度感受性SV40T抗原遺伝子導入ラットを用いた血液網膜関門培養細胞実験系の開発
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12557226
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| Research Institution | TOYAMA MEDICAL AND PHARMACEUTICAL UNIVERSITY |
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Principal Investigator |
細谷 健一 富山医科薬科大学, 薬学部, 教授 (70301033)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
河津 剛一 参天製薬, 眼科研究所・動態研究グループ, マネージャー(研究職)
帯刀 益夫 東北大学, 加齢医学研究所, 教授 (10099971)
片山 和憲 富山医科薬科大学, 薬学部, 助教授 (70126514)
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| Keywords | 条件的不死化細胞株 / TR-MUL細胞 / 内側血液網膜関門 / vitamin C / GLUT1 / 酸化的ストレス |
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| Research Abstract |
網膜は常に光に暴露されていることから、フリーラジカルなどが生成され酸化的ストレスを多く受けている組織である。Vitamin Cは網膜内に血液中に比べ10倍以上の高濃度で存在し、網膜の酸化的ストレスから保護する上で重要な働きをしている。本研究は、本課題において温度感受性SV40T抗原遺伝子導入ラットから樹立した条件的不死化網膜Muller細胞株(TR-MUL)をMuller細胞のin vitroモデルとして用い、vitamin Cの輸送機構を解明することを目的とした。Vitamin Cの輸送解析は酸化型のdehydroascorbic acid(DHAA)と還元型のascorbic acid(AA)の^<14>Cラベル体を用いて行った。TR-MUL細胞における[^<14>C]DHAAの初期取り込み速度は1.80μL/(min・mg protein)であり、[^<14>C]AAへの初期取り込み速度よりも6.8倍高い値を示した。[^<14>C]DHAAおよび[^<14>C]AAのTR-MUL細胞における取り込みは両者ともNa^+非依存性を示し、Na^+-dependent vitamin C transporter(SVCT)を介したAA輸送の可能性は低いことが示唆された。[^<14>C]DHAA取り込みは促進輸送型ヘキソース輸送担体(GLUT)の基質であるD-glucose、3-O-methyl-D-glucoseおよび2-deoxyglucoseや阻害剤であるphloretinおよびcytochalasin Bによって強く阻害された。さらに、cytochalasin Bによる[^<14>C]DHAAの取り込み阻害定数(IC_<50>)は0.28μMであった。RT-PCR解析から、TR-MUL細胞にはGLUT1、GLUT3およびGLUT4が発現していることが示された。リアルタイム定量PCRの結果、GLUT1はGLUT3の5.9倍、GLUT4に対して116倍高い発現を示した。HPLC解析から、DHAAはTR-MUL細胞に取り込まれた後にAAに変換され浸透圧等の外界刺激でeffluxされることが明らかとなった。以上の結果から、Muller細胞vitamin C輸送は主にDHAAとしてGLUT1を介して輸送されていることおよび輸送されたDHAAは外界の刺激でAAとしてeffluxされることが示された
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Research Products
(5 results)
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[Publications] M.Tomi: "Expression and regulation of L-cystine transporter, system X_c^-, in the newly developed rat retinal Muller cell line (TR-MUL)"Glia. 43. 208-217 (2003)
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[Publications] T.Kondo: "Establishment of conditionally immortalized rat retinal pericyte cell lines (TR-rPCT) and their application in a co-culture system using retinal capillary endothelial cell line (TR-iBRB2)"Cell Struct.Funct.. 28. 145-153 (2003)
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[Publications] L.Shen: "Recombinant arginine deiminase as a differential modulator of Inducible (iNOS) and endothelial (eNOS) nitric oxide synthetase activity in cultured endothelial cells"Biochem.Pharmacol.. 66. 1945-1952 (2003)
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[Publications] T.Terasaki: "New approaches to in vitro models of the blood-brain barrier drug transport"Drug Discov.Today. 8. 944-954 (2003)
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[Publications] K.Hosoya: "Vitamin C transport in oxidized form across the rat blood-retinal barrier"Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.. 45(印刷中). (2004)
