2001 Fiscal Year Annual Research Report
新世代抗体-抗メタタイプ抗体及び超抗体-の創製とその臨床分析システムへの応用
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12557236
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| Research Institution | Tohoku University |
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Principal Investigator |
後藤 順一 東北大学, 大学院・薬学研究科, 教授 (80006337)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
小林 典裕 東北大学, 大学院・薬学研究科, 助教授 (90205477)
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| Keywords | 抗メタタイプ抗体 / 超抗体 / 臨床分析化学 / 非競合型イムノアッセイ / アフィニティーラベル / デオキシコール酸 / アシルアデニレート / アシルグルクロニド |
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| Research Abstract |
抗体は生体内微量成分の分析に不可欠であるが、低分子化合物に対する抗ハプテン抗体の親和力には限界があるため、attomoleレベルの感度を得ることは不可能に等しい。そこで、従来調製が困難とされるモノクローナル抗メタタイプ(Met)抗体(抗原抗体複合体を特異的に認識する抗体)を調製し、これをキーマテリアルとするハプテンの高感度非競合型イムノアッセイの構築を企画した。抗Met抗体を調製するためには、抗ハプテン抗体とハプテンの複合体で動物を免疫することになるが、投与後の解離を防ぐために、抗体のパラトープをハプテンでアフィニティーラベルすることが望ましい。従来の光化学反応基を利用するアフィニティーラベル化剤では、反応収率が低いうえ、紫外線により抗体がダメージを受けるおそれがある。一方、活性エステル型ラベル化剤は、反応収率に優れるうえ、pHのコントロールという緩和な条件でラベル化反応のオン-オフが可能な利点がある。アシルアデニレート及びアシルグルクロニドは水溶性に富む活性エステルで、アフィニティーラベル化剤としてとりわけ有用と期待される。そこで、モデルハプテンとして二次胆汁酸であるデオキシコール酸(DCA)を取り上げ、そのアシルアデニレート及びアシル-2-デオキシグルクロニド(分子内アシル転位を防ぐために2位の水酸基を除いた)新規に合成した。これらエステルのペプチドとの反応性をMALDI-TOFMSを用いて解析したところ、期待どおりpHによる反応のコントロールが可能で、またアデニレートがより反応性に優れることが判明した。そこで、DCAアデニレートによるマウスモノクローナル抗DCA抗体のアフィニティーラベルを試みたところ、満足のいく結果が得られた。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Norihiro Kobayashi: "Noncompetitive immunoassays for small molecules with high sensitivity and specificity"Advances in Clinical Chemistry. 36. 139-170 (2001)
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[Publications] 後藤 順一: "低分子生理活性物質に対する抗体の分子認識とイムノアッセイの高感度化"TDM研究. 18. 77-78 (2001)
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[Publications] Shigeo Ikegawa: "The enantioselective immunoaffinity extraction of an optically active ibuprofen-modified peptide fragment"Analytical Biochemistry. 296. 63-72 (2001)
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[Publications] Nariyasu Mano: "Simultaneous detection of cholyl adenylate and coenzyme A thioester utilizing liquid chromatography/electrospray ionization mass spectrometry"Analytical Sciences. 17. 1037-1042 (2001)
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[Publications] Nariyasu Mano: "Characterization of rat liver bile acid acyl glucuronosyltransferase"Steroids. 67. 257-262 (2002)
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[Publications] Norihiro Kobayashi: "A monoclonal antibody-based enzyme-linked immunosorbent assay of glycolithocholic acid sulfate in human urine for liver function test"Steroids. in press.
