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2002 Fiscal Year Annual Research Report

GCP症候群の相同疾患マウスにおける責任遺伝子Gli3とShh遺伝子の発現異常

Research Project

Project/Area Number 12670015
Research InstitutionTottori University

Principal Investigator

成瀬 一郎  鳥取大学, 医学部, 教授 (20113326)

KeywordsGli3 / Shh / Pdn / GCPS
Research Abstract

Pdn/Pdnマウスでは、責任遺伝子であるGliの極端な発現抑制が明らかになっていたので、Gli3遺伝子の突然変異部位の特定に努めてきた。その間に、Rutherらによって、Pdnマウスでは、Gli3遺伝子のイントロンにトランスポゾンが挿入されていることが報告され、そのトランスポゾンがイントロン3に挿入されていることを明らかにしてきた。本研究において、このトランスポゾンの正確な挿入箇所と実態の解明を目指した。エクソン3と4にプライマーを設計し、LA-PCRを行った結果、約11KbのPCR産物が得られ、これをシークエンスした。その結果、エクソン4側の約10Kbが解読された。その後、エクソン3の下流1.8Kbの配列を明らかにした。結果的にはイントロン3は65.8Kbもあり、そこで、これらの塩基配列をNCBI Annotation ProjectのデータベースでBLAST検索した結果、Intron3はNW_000072に含まれることが判明した。また、Gli3遺伝子のイントロン3の上流から41286/41287bpに5442bpのトランスポゾーンが挿入されていることが判明した。
Pdn/Pdn,Pdn/+,+/+胎仔の遺伝子型を胎生早期より識別する簡便な方法を開発するために、トランスポゾン挿入部位の上流にプライマーF5を、下流にR6を、トランスポゾンにetn11Fを設計した。その結果、+/+では214bp(F5⇔R6)だけの、Pdn/+では214bp(F5⇔R6)と180bp(etn11F⇔R6)の、Pdn/Pdnでは180bp(etn11F⇔R6)だけのバンドが得られた。Pdnマウス胚の卵黄嚢膜からgenomic DNAを抽出し、この方法で遺伝子型を決定後、胚本体からRNAを抽出し、競合RT-PCRを行い、Gli3とShhの遺伝子発現量を測定した。Gli3遺伝子発現量は、いずれの胎齢でも、Pdn/Pdn、Pdn/+は、+/+に比べ発現抑制されていたが、Shhでは胎生9日に限って、Pdn/PdnやPdn/+は、+/+より高い値を示した。

  • Research Products

    (7 results)

All Other

All Publications (7 results)

  • [Publications] Ueta E., Nanba E., Naruse I.: "Integration of a transposon into the Gli3 gene in the Pdn mouse"Cong. Anom.. 42:4. 318-322 (2002)

  • [Publications] Naruse I, Ueta E.: "Hydrocephalus manifestation in the genetic arhinencephaly mouse (Pdn)"Cong. Anom.. 42:1. 27-31 (2002)

  • [Publications] Naruse I., Keino H., Yamada Y., Masaki S., Hui C-C.: "Phenotypic differences in the brains and limb of mutant mice caused by differences of Gli3 gene expression levels"Cong. Anom.. 41:2. 89-94 (2001)

  • [Publications] Tanaka T., Naruse I., Hongo T., Xu M-J., Nakahata T., Ishii S.: "Extensive brain hemorrhage and embryonic lethality in a mouse null mutant of CREB-binding protein"Mech. Develop.. 95. 133-145 (2000)

  • [Publications] Hongo T., Hakuba A., Shiota K., Naruse I.: "Suckling Dysfunction Caused by Defects in the Olfactory System in Genetic Arhinencephaly Mice"Biol. Neonate. 78. 293-299 (2000)

  • [Publications] Naruse I., Keino H., Yamada Y., Masaki S.: "Mechanism of polydactyly manifestation in mice and its extrapolation to humans"Cong. Anom.. 40・Supple. S25-S33 (2000)

  • [Publications] 成瀬 一郎: "形の科学辞典"形の科学会編, 朝倉書店(未定). (2003)

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Published: 2004-04-07   Modified: 2016-04-21  

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