マウス破骨細胞分化因子(RANKL)遺伝子プロモータ領域の解析

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12670204
• Research Institution: Kobe University
• Principal Investigator: 北澤 理子 神戸大学, 医学部, 講師 (00273780)
• Keywords: 破骨細胞 / RANKL / 遺伝子プロモータ / ビクミソD3 / メテル化シトシン

Research Abstract

破骨細胞形成において骨芽細胞系の果たす役割は、1)骨髄造血系細胞〜破骨細胞系の増殖に必要な液性因子の供給、2)破骨細胞への最終分化に不可欠な直接接触を介する相互作用、の2段階が想定される。後者の機能を担う分子として1998年に同定された破骨細胞分化因子(RANKL)の発現調節機構を解明するために私どもはマウスRANKL遺伝子5'上流プロモータ領域をクローニングし、vitamin D3(vitD)や種々のサイトカインの作用の詳細について検討した。マウスRANKL遺伝子プロモータには、典型的なDR3構造ではないが-937/-922にはvitD存在下でVDR-RXRのヘテロダイマーと特異的に結合するelementが存在した。EMSA法にてDNA蛋白結合の特異性を示すとともに、-937/-922にmutationを導入した遺伝子コンストラクトを作製して培養細胞に導入しレポーターアッセイを行い、-937/-922の配列がvitDのRANKL転写亢進作用に不可欠であることを示した。さらに、グルココルチコイドのRANKL遺伝子発現に及ぼす作用に着目して、マウスRANKL遺伝子プロモータ領域のputativeなグルココルチコイド応答配列について、EMSA法やmutation導入などの詳細な検討を続けている。また、悪性腫瘍骨転移の症例において骨浸潤局所でのRANKL遺伝子発現を評価することを目指して、マウスおよびヒトRANKL遺伝子に対する高感度・特異的なプローブを作成し、病理組織標本でのin situ hybridization法の施行に向けて基礎的検討を行っている。
以上の成果は、英文誌に投稿し現在reviseの段階である。また、成果の一部は第89回日本病理学会総会、第18回日本骨代謝学会、第22回米国骨代謝学会議、第23回IAPにて報告した。

Research Products

• [Publications] Kitazawa S et al: "Identification of methylated cytosine from archival formalin-fixed paraffin-embedded specimens."Lab Invest. 80・2. 275-276 (2000)
• [Publications] Yano S et al: "Association of decreased calcium-sensing receptor expression with proliferation of parathyroid cells in secondary hypreparathyroidism."Kidney Int. 58・11. 1980-1986 (2000)
• [Publications] Takeuchi K et al: "Immunohistochemical detection of PTHrP in a squamous cell carcinoma arising from mature cystic teratoma causinh humoral hypercalcemia of malignancy."Gynecol Oncol. 79・3. 504-507 (2000)
• [Publications] 北澤荘平 他: "免疫組織化学とin situ hybridizationのすべて:非放射性プローブ."病理と臨床. 18・臨時増刊号. 245-251 (2000)
• [Publications] Sakamoto Y et al: "Methykation of CpG loci in 5'-flanking region alters steady-state expression of adenomatous polyposis gene in colon cancer cell line."J Cell Biochem. (in press).
• [Publications] Tamada H et al: "Methylation of CpG island of human bone morphogenetic protein-6 gene promoter alters its steady-state expression in prostatic lesion."J Bone Miner Res. (in press).