2000 Fiscal Year Annual Research Report
リボザイムを用いた、腫瘍性細胞増殖に関わるras癌遺伝子の機能解析
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12670217
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| Research Institution | Tokai University |
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Principal Investigator |
鬼島 宏 東海大学, 医学部, 講師 (90204859)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
上山 義人 東海大学, 医学部, 助教授 (30072408)
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| Keywords | リボザイム / 癌遺伝子 / ras遺伝子 / ウイルスベクター / 腫瘍性増殖 / 遺伝子治療 |
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| Research Abstract |
ヒト癌で高頻度に点突然変異が認められるK-ras癌遺伝子の変異型mRNAを標的としたリボザイム(anti-K-ras Rz)をデザインし、アデノウイルスベクターに組み込んで、発現させる系を確立した。つまり、(1)ヒト膵癌で、高頻度に求められるK-ras癌遺伝子codon 12突然変異(GGT→GTT)mRNAに対するリボザイム(anti-K-ras Rz)をデザインし、これを発現するアデノウイルスベクター(Ad/anti-K-ras Rz)を作成した。(2)リボザイム発現アデノウイルスベクター(Ad/anti-K-ras Rz)を標的ヒト膵癌細胞(Capan-1細胞)に導入したところ、この導入細胞では変異型K-ras mRNAの発現が特異的に抑制された。経時的観察では、感染後2日目でK-ras mRNA発現抑制効果が最大となった。(3)Ad/anti-K-ras Rzによるリボザイム感染導入細胞では、細胞がアポトーシスとなり、これにより細胞増殖が抑制されることが確認された。(4)Ad/anti-K-ras Rzによるリボザイム感染導入細胞では、bcl-2蛋白発現の抑制ならびにDNAラダーが認めらた。これらのことより、Ad/anti-K-ras Rzはヒト膵癌の変異型K-ras mRNAを特異的に抑制し、その下流に位置するbcl-2発現抑制を介して、細胞をアポトーシスへと誘導し、細胞増殖抑制効果を示すものと判断された。
変異型(活性型)K-ras mRNAを標的としたリボザイムは、アデノウイルスベクターによりヒト膵癌細胞に効率よく導入され、標的細胞内でも特異的に変異型K-ras mRNAを分解・発現制御して、癌細胞の増殖を著明に抑制した。これは、ヒト膵癌の遺伝子治療への応用の可能性を示唆する結果であった。今年度の主な研究成果は"Adenovirus-mediated anti-K-ras ribozyme induces apoptosis and growth suppression of human pancreatic carcinoma"として論文発表された(Cancer Gene Therapy 7(3):373-383,2000)。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Y.Oshika,H.Kijima, et al.: "Ribozyme approach to downregulate vacular endoethelial growth factor (VEGF) 189 expression in non-small cell lung cancer (NSCLC)"European Journal of Cancer. 36(18). 2390-2396 (2000)
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[Publications] T.Tokunaga,H.Kijima, et.al.: "Ribozyme mediated inactivation of mutant K-ras oncogene in a colon cancer cell line"British Journal of Cancer. 83(6). 833-839 (2000)
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[Publications] H.Hatanaka,H.Kijima, et.al.: "Clinical implications of interleukin (IL)-10 induced by non-small-cell lung cancer"Annals of Oncology. 11(7). 815-819 (2000)
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[Publications] F.Morino,H.Kijima, et.al.: "Hammerhead ribozyme specifically inhibits vascular endothelial growth factor gene expression in a human hepatocellular carcinoma cell line"International Journal of Oncology. 17(3). 495-499 (2000)
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[Publications] H.Kijima and K.J.Scanlon.: "Ribozyme as an approach for growth suppression of human pancreatic cancer"Molecular Biotechnology. 14(1). 59-72 (2000)
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[Publications] T.Tsuchida,H.Kijima, et al.: "Adenovirus-mediated anti-K-ras ribozyme induces apoptosis and growth suppression of human pancreatic carcinoma"Cancer Gene Therapy. 7(3). 373-383 (2000)
