2001 Fiscal Year Annual Research Report
成熟Tリンパ球の細胞死を抑制し生存を支持する因子の同定
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12670298
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
鈴木 治彦 名古屋大学, 大学院・医学研究科, 助教授 (90283431)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
中島 泉 名古屋大学, 大学院・医学研究科, 教授 (40022826)
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| Keywords | 遺伝子クローニング / リンパ節由来ストロマ細胞 / T細胞生存因子 / サイトカイン / ケモカイン / 機能的アッセイ / ノックアウトマウス / 遺伝子ターゲティング |
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| Research Abstract |
1.静止期T細胞の生存を支持する因子の遺伝子クローニング
リンパ節由来ストロマ細胞からmRNAを調製し、cDNAライブラリーを作製した。ライブラリーは哺乳動物細胞発現型ベクターに組み込み、COS-7細胞へ導入した。100クローンを1プールとして機能的アッセイ法による一次スクリーニングを行い、陽性プールについてはクローンごとの二次スクリーニングを行った。最終的に1,000プール、約10万クローンのスクリーニングを行い、8クローンの最終候補が得られ、それらについては機能的にT細胞の生存を支持する能力があることが確かめられた。8クローンはいずれもデータベースにマウス遺伝子の配列が登録されているものであったが、ESTによって登録されているだけで機能的には不明のものが2クローンあった他、すでにT細胞の生存に影響を与えることが証明されたものはなかった。クローニングされた中には、C-Cケモカインの一つであるC-Cケモカイン6(C10)も含まれていた。
2.C-Cケモカイン6およびC-Cケモカイン9のノックアウトマウス作製
遺伝子クローニングによってケモカインの一つが得られたことから、このケモカインとT細胞の生存とに何らかの関わりがあることが示され、さらにケモカインのT細胞生存に対する意義を証明する必要が生じた。得られたC-Cケモカイン6と、ゲノム上でその近傍に存在するC-Cケモカイン9について、それらの生体内全般における機能を探索する目的でノックアウトマウスの作製に着手した。また、C-Cケモカイン6とC-Cケモカイン9の同時ノックアウトも平行して進めることとした。それぞれについて、遺伝子ターゲティング用のプラスミドを構築し、ES細胞への導入を行っている。
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[Publications] Dai, Y.: "T-cell-immunity-based inhibitory effects of orally administered herbal medicine juzen-taiho-to on the growth of primarily developed melanocytic tumors in RET-transgenic mice"Journal of Investigative Dermatology. 117. 694-701 (2001)
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[Publications] Wu, J.: "Cepharanthine activates caspases and induces apoptosis in Jurkat and K562 human leukemia cell lines"Journal of Cellular Biochemistry. 82. 200-214 (2001)
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[Publications] Hayakawa, A.: "Activation of caspase-8 is critical for sensitivity to cytotoxic anti-Fas antibody-induced apoptosis in human ovarian cancer cells"Apoptosis. 7. 107-113 (2002)
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[Publications] Wu, J.: "Modes of activation of mitogen-activated protein kinases and their roles in cepharantine-induced apoptosis in human leukemia cells"Cellular Signal. (in press).
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[Publications] Akhand, AA.: "Glyoxal and methylglyoxal trigger distinct signals for map family kinases and caspase activation in human endothelial cells"Free Radical and Biological Medicine. 31. 20-30 (2001)
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[Publications] Du, J.: "Superoxide-mediated early oxidation and activation of ASK1 are important for initiating methylglyoxal-induced apoptosis process"Free Radical and Biological Medicine. 31. 469-478 (2001)
