培養肝細胞を用いたC型肝炎ウイルス増殖過程の解析と抗ウイルス薬開発への応用

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12670477
• Research Institution: Mie University
• Principal Investigator: 垣内 雅彦 三重大学, 医学部, 講師 (70214244)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 小原 道法 東京都臨床医学総合研究所, 感染生体防御研究部門, 室長 (10250218) ; 渡邉 省三 三重大学, 保健管理センター, 教授 (20134934) ; 生駒 次朗 三重大学, 医学部・附属病院, 助手 (80283521)
• Keywords: C型肝炎ウイルス / 培養細胞 / 電子顕微鏡 / 免疫電子顕微鏡 / 免疫組織化学 / ウイルスベクター / ラクトフェリン

Research Abstract

我々は、C型肝炎ウイルス(HCV)の粒子の超微形態を明らかにし、Journal of General Virology,75,1755-1760,1994に報告しました。その後、我々は、患者血清中のHCVコアー粒子が正二十面体の直経33〜40nmの球形粒子であることを明らかにし、Hepatology Research,20,335-347,2001.に報告した。さらに、HCV粒子は超遠心過程で壊れやすく、パラホルムアルデヒドでウイルス粒子を固定することにより、効率よくHCV粒子の分離・精製が行えることを明らかにし、Journal of Medical Virology,63(2),108-116,2001に報告した。HCVの培養細胞系では、ヒト肝細胞とHepG2細胞を紫外線照射にて不活化したセンダイウイルスを用いて融合し、ヒト肝細胞由来IMY細胞を樹立しました。この細胞にC型慢性肝炎患者血清を添加するとHCV(10^4copies/ml程度)の培養が可能となりました。IMY細胞はNativeなHCVの増殖が可能な細胞です。この細胞にHCV全長遺伝子(type 1b)のcDNAを遺伝子工学的手法を用い、効率よくHCV(10^<10>copies/ml以上)を複製することができるようになりました。このシステムを用い、HCVの増額は細胞質内で行われ、滑面小包体内へHCV粒子が出芽し、細胞外へと排出されることを電子顕微鏡下に明らかとし、更に培養細胞の上清中に多数のHCVが存在することを免疫電子顕微鏡下にとらえた。この研究結果を第51回と第52回米国肝臓学会に発表した。更に牛ラクロフェリンがGenotype 1b,高ウイルス量のC型慢性肝炎患者のウイルス量を低下させることを明らかとし、第52回米国肝臓学会に発表し、American Journal of Gastroenterology,97(3),766-777,2002.に報告しました。

Research Products

• [Publications] Satoshi Ishida, Masahiko Kaito, Michinori Kohara, Shozo Watanabe et al: "Hepatitis C virus core particle detected by immunoelectron microscopy and rotation technique"Hepatology Research. 20. 335-347 (2001)
• [Publications] Naoki Fujita, Masahiko Kaito, Jiro Ikoma, Shozo Watanabe et al.: "Paraformaldehyde protects of hepatitis C virus particles during ultacentrifugation"Journal of Medical Virology. 63・2. 108-116 (2001)
• [Publications] Kaito Masahiko, Jiro Ikoma, Shozo Watanabe, Michinori Kohara et al: "Hepatitis C virus particles detected in the IMY cell culture supernatant by immunoelectron microscopy"Hepatology(AASLD ABSTRACTS). 32・4. 175-175 (2000)
• [Publications] Masaki Takeo, Masahiko Kaito, Motoh Iwasa, Naoki Fujita, et al.: "Lactoferrin inhibits hepatitis C virus(HCV)viremia in chronic hepatitis C patients with a high viral load and HCV genotype 1b"Hepatology(AASLD ABSTRACTS). 34・4. 331-331 (2000)
• [Publications] Masahiko Kaito, Shozo Watanabe, Kyoko Tsukiyama-Kohara, et al.: "Propagation feature of hepatitis C virus in IMY cell by immunogold electron microscopy"Hepatology(AASLD ABSTRACTS). 34・4. 489-489 (2001)
• [Publications] Motoh Iwasa, Masahiko Kaito, Yukihiko Adachi, et al.: "Lactoferrin inhibits hepatitis C virus(HCV)viremia in chronic hepatitis C patient with a high viral load and HCV genotype Ib"American Journal of Gastroenterology. 97・3. 766-767 (2002)