肝発生、肝再生、肝発癌における肝癌由来増殖因子(HDGF)の役割

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12670484
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 中村 秀次 大阪大学, 医学系研究科, 講師 (20237423)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 黒田 了文 大阪大学, 医学部・附属病院, 医員
• Keywords: HDGF / 肝発生 / 肝再生 / 肝発癌 / 肝細胞増殖 / 胎生期未熟肝細胞 / FLSマウス / CDAA食ラット

Research Abstract

1.肝細胞の分化・増殖におけるHDGFの解析:初代培養胎生期肝細胞はリコンビナントHDGF添加効果は15%と弱かったが、これは内因性に多量に存在するHDGFによる自律増殖活性が高いために添加されるHDGFの増殖促進効果が低くなった為と思われる。アデノウイルスを用いたアンチセンスHDGFcDNA導入による内因性HDGF産生抑制により未熟肝細胞の増殖抑制(30MOIにて細胞数で約80%)が認められ、この増殖抑制はリコンビナントHDGFの添加にて回復された。HDGFはautocrne, paracrineに胎生期の未熟肝細胞の自律増殖に深く関与する因子の一つである。
2.肝再生過程におけるHDGFの解析:HDGFmRNAの発現は70%肝切除モデル、四塩化炭素肝障害モデルの解析にてDNA合成より早期に誘導される事を報告した。Western blot法にてHDGF蛋白レベルでも両モデルにおいて発現の上昇を確認した。免疫組織染色法にてHDGFは肝実質細胞に発現していた。アルブミンプロモーターを用いたHDGFトランスジェニックマウスにおける解析は現在HDGF高発現の良いラインを作製中である。
3.肝発癌過程におけるHDGFの関与:ヒト肝癌症例の手術切除サンプル4例全例において癌部では非癌部に比し2〜3倍のHDGFmRNAの高発現が認められた。肝発癌モデル動物として、FLSマウスとCDAAラットを用いてHDGF発現の解析を行った。FLSマウスにおいては、脂肪肝を形成し、生後10ヶ月頃から肝腫瘍、肝癌が発生する。FLSマウスにおけるHDGFの発現はWestern blot法にて肝癌では非癌部に比し有意に亢進していた。CDAA食ラットにおいても同様に肝癌では非癌部に比し有意に高発現していた。興味有ることに、FLSマウスの出生後の経時的な発現解析にて肝癌の発生する時期より早期からHDGFの発現亢進が認められた。免疫組織染色法にて肝癌出現前の時期でHDGFの高発現している数10個の細胞からなるHDGF highly expressing fociの出現を発見した。このfociではBrdUの取込みが認められた。このfociはHE染色では判別できず、HDGFが前癌病変の診断マーカーになる可能性も示唆された。以上より、HDGFは肝癌の前段階の細胞で既に高発現することを示しており肝発癌に関与する重要な因子の一つであると思われた。

Research Products

• [Publications] Enomoto H., Kishima Y., Yoshida K., Nakamura H.: "Hepatoma-derived growth factor : Involvement in liver development and regeneration"Trends in Gastroenterol.Hepatol.. 302-305 (2001)
• [Publications] Kishima Y, Yamamoto H, Izumoto Y, Yoshida K, Enomoto H, Yamamoto M, Kuroda T, Ito H, Yoshizaki K. Nakamura H.: "Hepatoma-derived Growth Factor Stimulates Cell Growth after Translocation to The Nucleus by Nuclear Localization Signals"J. Biol. Chem.. (in press). (2002)
• [Publications] Kishima Y., Yoshida K., Enomoto H., Yamamoto M., Kuroda T., Okuda Y., Uyama H., Yoshizaki K., Nakamura H.: "Antisense oligonucleotides of hepatoma-derived growth factor (HDGF) suppress the proliferation of hepatoma cells"Hepato-Gastroenterol.. (in press). (2002)
• [Publications] Enomoto H., Yoshida K., Kishima Y., Okuda Y., Nakamura H.: "Participation of hepatoma-derived growth factor (HDGF) in the regulation of fetal hepatocyte proliferation"Journal of Gastroenterology. (in press). (2002)
• [Publications] 中村秀次, 榎本平之, 貴島芳彦, 吉田賢哉, 黒田了文: "肝癌由来増殖因子HDGFとHDGFファミリー"日本臨床(増刊号6肝癌の診断と治療-最近の研究動向-). 59. 834-838 (2001)