膜糖蛋白GPVの血小板活性化のnegative regulatorとしての機能-GPVの細胞内ドメイン結合蛋白の同定-

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12670990
• Research Institution: Hiroshima University
• Principal Investigator: 藤村 欣吾 広島大学, 医学部, 教授 (80034114)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 下村 壮司 広島大学, 医学部, 助手 (20263741) ; 藤元 哲郎 広島大学, 医学部, 助教授 (00221549)
• Keywords: 血小板 / GPV / フォンヴィルブランド因子受容体 / トロンビン / 情報伝達 / Two hybrid system / 細胞内ドメイン / 巨核球

Research Abstract

血小板のフォンヴィルブランド因子に対するレセプターであるGPIb/V/IX複合体のサブユニットの一つであるGPVについて、血小板活性化におけるnegative regulatorとしての機能発現を明らかにするために、GPVの細胞内ドメインと結合する蛋白をyeast two hybrid systemを用いてスクリーニングを行った。ヒトとマウスのGPVではマウスの方がアミノ酸が8個余分に付加されており、マウスGPV由来の細胞内ドメインのcDNAからbait vectorを作成した。さらにマウス巨核球系細胞株におけるGPVの発現をスクリーニングし、もつともGPVの発現の高かった細胞株よりcDNAライブラリーを作成した。yeast two hybrid systemを用いたスクリーニングでfilter lift assayの結果、2種の陽性クローンを得、さらにこれらのクローンの解析を行っている。また、GPIbの細胞内ドメイン結合蛋白の1つであるFlaminについて、そのさらに下流の情報伝達系を明らかにするために、Filaminの結合蛋白もtwo hybrid systemによって同定し、その機能解析を行った。同時に、GPVのノックアウトマウスによる解析では、GPVが血小板機能を負に調節する膜蛋白であるとの考えと、その反対の報告もなされており、過剰発現での解析も必要と考え、トランスジェニック作成用のベクターも作成し、基礎検討を行っている。

Research Products

• [Publications] Fujii,T. et al.: "A new approach to detect reticulated platelets stained with thiazole orange in thrombocvtopenic patients."Thrombosis Research. 97. 431-440 (2000)
• [Publications] 坂井晃 ら: "IgG-κ型M蛋白血症を認めたMALTリンパ種"臨床血液. 41. 658-663 (2000)
• [Publications] 藤村欣吾 ら: "Bernard-Soulier症候群"日本血栓止血学会誌. 11. 411-419 (2000)