発生工学動物を利用した腎Na-Clトランスポーター遺伝子機能及び発現解析

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12671020
• Research Institution: Tohoku University
• Principal Investigator: 竹内 和久 東北大学, 大学院・医学系研究科, 助教授 (40260426)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 伊藤 貞嘉 東北大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (40271613)
• Keywords: HFH-3 / 転写調節 / 腎曲尿細管

Research Abstract

ラットサイアザイド感受性Na-Clトランスポーター(TSC)は腎曲尿細管に局在するトランスポーターである。本年度はこのTSCの組織特異的発現機構について転写レベルでの解明を試みた。TSC遺伝子の転写調節領域(5'-FL/TSC)の約2kbをクローニングし、その細胞特異的転写活性をルシフェラーゼレポーター遺伝子アッセイにて検討した。その結果、この5'-FL/TSCは腎臓由来で、TSCを内因性に発現するHEK293細胞においてのみ転写活性が著明であることが明らかとなり、5'-FL/TSCは組織発現に関与する転写調節領域であることが判明した。この結果を踏まえ、この領域とLacZ遺伝子を融合したコンストラクトを作成して、これを用いてトランスジェニックラットを作成した。その結果、LacZ遺伝子産物であるβ-galactosidaseが腎曲尿細管に特異的に発現していることが明らかとなった。さらに、この転写機構にどのような転写調節因子が関与するかを検討した。我々は、TSC同様に腎曲尿細管に特異的に発現する転写因子のHFH-3に着目した。そして、deletion mutantsや核酸変異導入によって5'-FL/TSCの中にHFH-3結合領域を同定した。また、この領域はHFH-3過剰発現によって反応することを示した。さらに、ゲルシフトアッセイによって、in vitroに作成したHFH-3とこの5'-FL/TSC内のHFH-3結合配列は実際に特異的結合が見られることが明かとなった。以上の成果から、TSCの腎曲尿細管における特異的発現機構として、転写調節領域がそれを担っており、転写因子のHFH-3がその機構の一部に関与そていることが示唆された。

Research Products

• [Publications] Ikeda Y, 他: "Suppression of rat thromboxane synthase gene transcription by peroxisome proliferator activated-receptor(PPAR)-g in macrophages via an interaction of NF-E2 related factor 2."J.Biol.Chem.. 275. 33142-33150 (2000)
• [Publications] Taniyama.Y. 他: "Loss of function by a mutation thiazide-sensitive Na-Cl cotransporter found in Gitelman's syndrome."Control and Diseases of Sodium Dependent Transporter Proteins and Ion Channels.. 1. 55-56 (2000)
• [Publications] Taniyama.Y. 他: "Effect of steroid hormones on gene transcription of thiazide-sensitive Na-Cl cotransporter."Control and Diseases of Sodium Dependent Transporter Proteins and Ion Channels.. 1. 53-54 (2000)